فهرست مطالب

تحقیقات ژنتیک و اصلاح گیاهان مرتعی و جنگلی ایران - سال بیست و ششم شماره 1 (پیاپی 51، بهار و تابستان 1397)

نشریه تحقیقات ژنتیک و اصلاح گیاهان مرتعی و جنگلی ایران
سال بیست و ششم شماره 1 (پیاپی 51، بهار و تابستان 1397)

  • تاریخ انتشار: 1397/04/20
  • تعداد عناوین: 14
|
  • شوکت عالی پور امرایی، احمد اسماعیلی*، فرهاد نظریان فیروز آبادی، علی محمد لطیفی صفحات 1-11
    گیاه دارویی خشخاش (Papaver somniferum L.) به عنوان یکی از مهمترین منابع تجاری برای برخی از آلکالوئیدهای دارویی مانند ضد درد کدئین و مورفین و داروهای نیمه مصنوعی مانند اکسی کدون، بوپرونورفین و نالتروکسن میباشد. از ژنهای پائین دست مسیر بیوسنتزی آلکالوئیدها در این گیاه، ژن تبائین -6- ا- دمتیلاز (T6ODM) است که بر تولید موادی مانند تبائین و اوریپاوین تاثیرگذار است. در این پژوهش، اثر سازه خاموشی متکی بر فن VIGS، بر کاهش سطح بیان این ژن در گیاه خشخاش مطالعه شد. برای این منظور، ابتدا با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، cDNA ژن T6ODM تکثیر شد و برای تایید مورد توالی یابی قرار گرفت.
    سپس بخشی از ژن به عنوان قطعه هدف خاموشی در ناقل ویروسی pTRV همسانهسازی شد و به روش آگروباکتری، برگهای گیاه تراریخت شد. حضور ژن کد کننده پروتئین پوششی موجود در ناقل ویروسی در گیاهان با استفاده از PCR بررسی و سطح بیان ژن در گیاهان تراریخت توسط تجزیه وتحلیل نیمه کمی و PCR در زمان واقعی بررسی شد. نتایج نشان داد که میانگین بیان ژن T6ODM در گیاه حاوی سازه مورد نظر نسبت به گیاهان شاهد 71/83 درصد کاهش داشت.
    کلیدواژگان: خشخاش، اگروباکتری، PCR در زمان واقعی
  • داود جعفری، فاطمه دهقان نیری * صفحات 12-22
    داروی ضد سرطان تاکسول یا پاکلی تاکسل از متابولیت های بیوسنتز شده در سرخدار (Taxus bacatta) است. تاکسول یکی از مهمترین و کاربردی ترین داروهای ضد سرطان در درمان سرطان ریه است که با جلوگیری از پلیمریزاسیون میکروتوبول ها مانع از تقسیم سلولی در بافت های سرطانی می شود. عامل رونویسی JAMYC از خانواده MYC دارای موتیف متصل شونده به DNA به نام bHLH می باشد که در سایر گونه های سرخدار شناسایی شده است. هدف از این تحقیق جداسازی و همسانه سازی ژن عامل رونویسی TbJAMYC برای اولین بار و تجزیه وتحلیل بیوانفورماتیکی آن است. در ابتدا برای به دست آوردن گیاهچه های این گیاه رویان از دانه های این گیاه خارج و در محیط کشت MS حاوی زغال فعال و اسیداسکوربیک کشت شد. از RNA استخراج شده با کیفیت و کمیت خوب cDNA سنتز شد. ژن عامل رونویسی TbJAMYC به وسیله PCR از cDNA و آغازگرهای اختصاصی این ژن تکثیر شد. قطعه تکثیر شده در ناقل همسانه سازی pTG 19 به روش TA کلونینگ همسانه سازی و توالی یابی شد. خانواده پروتئینی و دمین های پروتئین TbJAMYC به وسیله نرم افزار Pfam تعیین شدند. همچنین به وسیله نرم افزار Modeller ساختار سه بعدی دمین ‏های متصل شونده به DNA این پروتئین تجزیه وتحلیل و مدل سازی شد. این تجزیه وتحلیل ها نشان دادند که پروتئین TbJAMYC جزء عوامل رونویسی MYC حاوی دمین bHLH برای اتصال به DNA و تنظیم بیان ژن ها می باشد.
    کلیدواژگان: تجزیه وتحلیل بیوانفورماتیکی، تاکسول، bHLH، سرخدار، عامل رونویسی MYC
  • حسین هنری *، سید مسیح اعتماد ایوبی، فرانک اسماعیلی، مسعود عبدالهی صفحات 23-31
    غاسول صابونی (L. Saponaria officinalis) گیاه بومی اروپای مرکزی و جنوبی و از خانواده Caryophyllaceae می باشد. این گیاه به عنوان گیاه مهم و کمیاب در ایران به حساب می آید. غاسول صابونی کاربردهای متعددی در حوزه های پزشکی، کشاورزی و بهداشت دارد. ساپونین یکی از ترکیبات فعال زیستی این گیاه است که در شیمی درمانی مورد استفاده قرار می گیرد. کشت بافت یکی از راه های تکثیر این گیاه است که برای تولید ماده موثره استفاده می شود. ساپونین 10 ایزوفرم دارد که در مهار ترجمه ریبوزوم و سمیت سلولی متفاوتند. یکی از ایزوفرم های ساپونین SO6 می باشد. در این تحقیق، به منظور بررسی حضور پروتئین، SO6 در کالوس گیاه غاسول صابونی، کشت بافت این گیاه به وسیله متغیرهایی مانند غلظت های مختلف تنظیم کننده های رشدی و عوامل محیطی، در شرایط درون شیشه ای مورد بررسی و ارزیابی قرار گرفت. پس از موفقیت آمیز بودن کشت بافت این گیاه، استخراج پروتئین از این گیاه انجام شد و حضور پروتئین، SO6 در کالوس با استفاده از روش وسترن بلات، تایید و میزان پروتئین از طریق روش الایزا اندازه گیری شد. نتیجه آزمایش ها نشان داد که بذر گیاه با استفاده از تیمار مناسب قادر به جوانه زنی بوده و کالوس حاصل از ریشه گیاه غاسول صابونی بیشترین میزان پروتئین SO6 را داشت.
    کلیدواژگان: پروتئین SO6، تنظیم کننده های رشدی، غاسول صابونی، کالوس
  • حسین میرزایی ندوشن*، جعفر حسین زاده، شهین مهرپور، پریسا پناهی، داریوش مهدیفر صفحات 32-43
    بلوط ایرانی (Quercus brantii Lindl.) گونه ای جنگلی است با عمر نسبتا طولانی که از نظر اقتصادی، اجتماعی و زیست محیطی در کشور ما اهمیت ویژه ای دارد. مجموعه عوامل انسانی و غیر انسانی سبب شده است که برخی از جوامع گیاهی این گونه در بعضی از رویشگاه های خود در معرض خشکیدگی و فرسایش ژنتیکی شدید قرار گیرند. از این رو ارزیابی تنوع و ساختار ژنتیکی این جوامع می تواند هدایتگر فعالیت های جنگل داران و محققان باشد. این پژوهش با هدف ارزیابی تنوع و توانمندی ژنتیکی جمعیتی از گونه بلوط ایرانی واقع در استان لرستان بر اساس ویژگی های نونهالی اجرا شد. ابتدا به طور تصادفی از 12 پایه بالغ که بذر کافی تولید کرده بودند بذرگیری شد و به منظور آزمون نتاج و ارزیابی پایه های بذرگیری شده، بذرها به عنوان 12 فامیل تنی و ناتنی در قالب طرح آماری بلوک های کامل تصادفی با سه تکرار کاشته شدند. با استفاده از مدل و روابط طرح آمیزشی آشیانه ای، آماره های بیومتریکی به آماره های ژنتیکی تبدیل شده و اجزاء واریانس و وراثت پذیری صفات ارتفاع نهال، تعداد برگ، طول و عرض برگ و قطر یقه تخمین زده شد. فامیل ها بین 6 تا 92 درصد استقرار نشان دادند. تجزیه واریانس نشان داد که از نظر همه ویژگی های مورد مطالعه تفاوت معنی داری بین درختان مادری وجود داشت. بخش عمده ای از واریانس حاصل متعلق به بین فامیلهای مورد مطالعه بود که به سبب آن وراثت پذیری صفات بین 57% در قطر یقه تا 95% در طول برگ نهال ها متغیر بود. جامعه گیاهی مورد مطالعه قابلیت استفاده در انتخاب پایه مناسب برای تشکیل باغ بذر و نیز اجرای برنامه های اصلاحی را به خوبی از خود نشان داد.
    کلیدواژگان: تنوع ژنتیکی، ساختار ژنتیکی، بلوط ایرانی، ویژگی های نونهالی
  • منصوره صداقتی*، محمدحسن عصاره، محمد علی ابراهیمی، سیدمحسن حسام زاده حجازی، حمید سبحانیان صفحات 44-52
    گزنه (Urtica dioica L.) گیاهی دوپایه و دگرگشن با ترکیبات موثره و خواص دارویی ویژه که ارزش اقتصادی بسیاری دارد. از آنجا که این گونه دارای هتروزیگوتی بالایی است، امکان تولید گیاهان منتخب از نظر مواد موثره و فیبر یکدست از طریق بذر را نداشته، به همین دلیل برای تولید و حفظ پایه های منتخب می توان از طریق تکثیر غیرجنسی و کشت بافت اقدام نمود. برای ریزازدیادی، از جوانه های راسی سرشاخه های گزنه به عنوان ریزنمونه استفاده شد. بعد از سترون نمودن ریزنمونه ها به محیط کشت MS (Murashige and Skoog، 1962) حاوی BAP (6-benzyl-aminopurine)، 2iP (N6-(2-Isopentenyl)adenine) و IBA (Indole-3-butyric acid) منتقل شدند. برای ارزیابی محیط کشت ها، ریزنمونه ها بعد از یک ماه به تیمارهای شاخه زایی شامل محیط های کشت (MS، DKW (Driver and Kuniyuki، 1984)، WPM (Lloyd and McCown، 1981)) با غلظت های متفاوت تنظیم کننده های رشد IBA، 2،4-D، BAP، KIN (6-Furfurylaminopurine)، 2iP، TDZ (Thidiazuron) منتقل شدند. آزمایش به صورت آزمون فاکتوریل در قالب طرح پایه کاملا تصادفی در سه تکرار بررسی و با برنامه نرم افزار آماری SAS (2006) تجزیه وتحلیل شد. از نظر آماری، بهترین محیط کشت پایه در شاخه زایی، محیط کشت WPM بود. بین تیمارهای ریشه زایی، تعداد ریشه اصلی در محیط حاوی KIN (mgl-15/0) + IBA (mgl-1 5/0 و 1) و تعداد ریشه فرعی ترکیب BAP (mgl-15/0) + IBA (mgl-1 5/0) بیشترین مقدار را نشان داد. بعد از ریشه زایی، گیاهچه های ریشه دار شده به گلخانه منتقل شده و با موفقیت (5/55 درصد) سازگار شدند.
    کلیدواژگان: تنظیم کننده های رشد گیاهی، گزنه، ریزازدیادی
  • لیلا میرجانی، اعظم سلیمی*، محمد متینی زاده، خدیجه رضوی، مریم شهبازی صفحات 53-62
    مرزه خوزستانی (JamzadSatureja khuzistanica) انحصاری ایران است و با وجود ارزش دارویی فراوان در حال انقراض می باشد. به منظور تکثیر انبوه آن از طریق ریزازدیادی، جوانه های جانبی از منطقه پل دختر استان لرستان جمع آوری شد. برای سترون سازی جداکشت ها بهترین تیمار محلول کلرید جیوه یک درصد به مدت 6 دقیقه تعیین شد. بهترین محیط نوشاخه زایی پس از بررسی 12 تیمار مختلف، محیط کشت پایه MS حاوی هورمون های BA، 2ip و IBAبه ترتیب 5/0، 3/0 و 1/0 میلی گرم در لیتر تعیین شد، که از لحاظ ضریب ازدیاد، رشد طولی و سبزینگی نسبت به بقیه تیمارها برتری داشت. محیط کشت پایه MS با هورمون هایIBA و NAA به ترتیب 1 و 1/0 میلی گرم در لیتر به عنوان بهترین محیط نوریشه زایی پس از انجام سه تیمار با ترکیب های هورمونی متفاوت به دست آمد، این محیط کشت محرک تولید بیشترین تعداد ریشه اصلی و فرعی بود. تاثیر 10 ترکیب مختلف خاک بر درصد زنده مانی در زمان سازگاری مورد بررسی قرار گرفت و تیمار ماسه: خاک مزرعه: پیت: پرلیت به نسبت 1:1:1:1 بیشترین درصد زنده مانی و رشد را داشت. بنابراین در طی این تحقیق مناسب ترین روش تکثیر برای گونه مرزه خوزستانی به دست آمد و می توان گیاهان تکثیر شده را به رویشگاه اصلی منتقل نمود.
    کلیدواژگان: تکثیر درون شیشه ای، تنظیم کننده های رشد، ریزازدیادی، مرزه خوزستانی
  • میترا امام *، لیلا میرجانی، محسن حسام زاده حجازی، محمد علی سلطانی پور صفحات 63-70
    مورخوش یا زومریا، با نام علمی Zhumeria majdae یکی از مهمترین گیاهان معطر از خانواده Lamiaceae با کاربرد دارویی و صنعتی است. این گیاه انحصاری ایران و از گیاهان در معرض انقراض به شمار می‏آید. بنابراین برای حفاظت و احیای آن نیاز به تکثیر انبوه گیاه از طریق روش‏های کشت بافت می باشد. تکثیر معمولی گیاه از طریق بذر است. جوانه های نهال‏های بذری پایه های موجود در منطقه هرمزگان پس از استریل با محلول کلرید جیوه 1/0 درصد در زمان 5 دقیقه در فصل بهار در محیط کشت مستقر شدند. نمونه ها در محیط کشت WPM با هورمون های 2iP، IBA و BA در غلظت‏های به ترتیب 1/0، 3/0 و 5/0 میلی گرم در لیتر بالاترین میزان استقرار و شاخه‏زایی را داشته و در همان محیط کشت باIBA یک میلی‏گرم در لیتر ریشه دار شدند. گیاهان حاصل از کشت بافت پس از انتقال به خاک گلدان و در شرایط گلخانه ای سازگار شدند. دستورالعمل این تحقیق قابل ارائه برای برنامه کشت گیاه در منطقه می باشد.
    کلیدواژگان: ریزازدیادی، کشت بافت، انحصاری، مورخوش
  • سلاله صلاحی صدر، هدایت زکی زاده*، محمدرضا نقوی، جمال العلی الفتی صفحات 71-83
    لاله واژگون (raddeana Fritillaria)، یکی از منحصر به فردترین و زیباترین گیاهان خودرو و بومی ایران است. این جنس از خانواده سوسن به شدت در معرض انقراض قرار دارد. گونه Fritillaria raddeana مقاوم به خشکی، مناطق سنگلاخی و شیب دار می باشد و به دلیل مطالعات محدود در این گونه، انجام هر گونه پژوهش در این گیاه اهمیت به سزایی دارد.
    با وجود احتمال وقوع جهش، باززایی موفقیت آمیز پیش نیاز کلیه مطالعاتی است که باید در گونه های رو به انقراض انجام شود. این پژوهش کالوس زایی و باززایی غیرمستقیم را از کشت اندام های گلبرگ و برگ F. raddeana در محیط درون شیشه ای مورد بررسی قرار داد. ریزنمونه های برگ پیش از گلدهی و ریزنمونه های گلبرگ در حالت غنچه (سبز تا زرد) برداشت شد و پس از ضدعفونی، در محیط کشت موراشیگ و اسکوگ همراه با غلظت های مختلف از اکسین و سایتوکینین کشت شدند. ریزنمونه ها برای القای کالوس ابتدا در تاریکی و دمای C°18 و بعد به روشنایی با شرایط دمایی قبل انتقال یافتند. پس از واکشت کالوس ها در محیط های باززایی، دما به C°20 افزایش یافت. اگرچه هر دو نوع ریزنمونه به دلیل عدم آسیب به گیاهان مادری، درصد نسبتا پایین آلودگی داخلی، تعداد و اندازه مناسب، ریزنمونه های قابل قبولی بودند، با این حال ریزنمونه گلبرگ دارای پاسخ دهی بهتر و سریع تر به انواع ترکیبات تنظیم کننده رشد بود. بهترین محیط کشت کالوس زایی (66/82%) و باززایی غیرمستقیم (66/36%) از ریزنمونه های گلبرگ، محیط MS حاوی 5/0 میلی گرم در لیتر ایندول بوتیریک اسید همراه با 2 میلی گرم در لیتر تیدیازورون تشخیص داده شد که نشان دهنده برتری این دو نوع تنظیم کننده در باززایی غیرمستقیم F. raddeana بود.
    کلیدواژگان: باززایی غیرمستقیم، تنظیم کننده رشد، کالوس زایی، گونه های وحشی، گیاه بومی
  • مسعود باباییان، داوود آزادفر *، محمد هادی پهلوانی، زهره سعیدی، محمدحسین ارزانش صفحات 84-100
    بادامک (Amygdalus scoparia spach.) گونه ای چند منظوره است که در بیشتر نواحی رویشی ایران پراکنش دارد. آگاهی از میزان تنوع ژنتیکی و برآورد وراثت پذیری پیش نیاز و لازمه حفاظت، توسعه جنگل کاری و بهره برداری پایدار از گونه های جنگلی است. پارامترهای ژنتیکی مراحل اولیه رشد جمعیت هایی از بادامک در استان فارس در آزمون توام پروونانس و نتاج بررسی شد. آزمون به طور آشیانه ای با استفاده از طرح بلوک کامل تصادفی با هفت جمعیت، ده درخت مادری در هر جمعیت و زیر پلات های هفت درختی با سه تکرار در نهالستان کهمره سرخی شیراز واقع در استان فارس (1660 متر ارتفاع از سطح دریا) انجام شد. برای همه صفت مورد مطالعه تفاوت های معنی دار میان جمعیت ها وجود داشت. به جز طول ریشه اصلی در بقیه صفات درختان مادری درون جمعیت ها نیز تفاوت های معنی داری مشاهده شد. ارزیابی اجزاء واریانس نشان داد که سهم واریانس جمعیت ها (دامنه 9/5 درصد تا 2/34 درصد) از میزان کل واریانس، بیشتر از سهم واریانس درختان مادری درون جمعیت ها (دامنه 8/1 درصد تا 1/11 درصد) بود. ضریب تنوع ژنتیکی افزایشی از صفر تا 6/58 در نوسان بود. در مجموع جمعیت های خنج و کوار از عملکرد رویشی بهتری برخوردار بودند. میزان وراثت پذیری صفات تعداد ساقه و شاخه جمعیت داراب بالاتر بود. وراثت پذیری برخی از صفات در بعضی از جمعیت ها پایین و هنوز از وضعیت پایداری برخوردار نبود. از این رو باید گزینش به زمانی که وراثت پذیری به مقادیر بالاتر و پایدارتری می رسد موکول شود.
    کلیدواژگان: آزمون پروونس نتاج، بادامک، صفات نونهالی، وراثت پذیری
  • حسین بی باک*، کیان آقاعباسی صفحات 101-113
    شناخت تنوع ژنتیکی از فعالیت های مهم در به نژادی و مدیریت حفظ ذخائر ژنتیکی گیاهان به شمار می آید. باتوجه به مشاهده گوناگونی صفات در بین آویشن شیرازی، در این تحقیق از نشانگر RAPD و ISSRبه منظور بررسی تنوع ژنتیکی بین جمعیتی آویشن شیرازی در ایران استفاده شد. برگ های آویشن از 15 مناطق مختلف کشوری از استان های کرمان، سیستان وبلوچستان ، بوشهر، فارس و خوزستان جمع آوری شدند. استخراج DNA از برگ به کمک روش CTAB با کمی تغییر انجام گردید. ده نشانگر RAPDو ده نشانگر ISSR که باندهای واضح تری در واکنش زنجیره ای پلی مراز تولید کرده بودند برای تجزیه وتحلیل استفاده شدند. با کمک نرم افزاز NTSYS-pc با استفاده از ضر یب تشابه دایس و الگوریتم میانگین فاصله (UPGMA) دندروگرام مربوطه رسم شد . ضریب کوفنتیک محاسبه شد و پلات دوبعدی بر اساس تجزیه به مولفه های اصلی شکل گرفت. باتوجه به نتایج حاصل، دامنه اندازه باندهای تولید شده در آغازگرها بین 120 تا 3100 جفت باز متغیر بود . پانزده منطقه انتخاب شده در 3 گروه مجزا قرار گرفتند .خوشه ایجاد شده با شرایط جغرافیایی همخوانی داشت. آغازگرها در مجموع 207 نوار چند شکل با درصد چندشکلی 9/86 تولید کردند. نتایج حاصل از ضریب تشابه دایس نرم افزار NTYSIS حکایت از این مطلب داشت که تشابه ژنتیکی توده آویشن شیرازی بین8460/0–4390/0 متغیر است. کمترین تشابه بین توده های جیرفت با ایرانشهر و بیشترین تشابه بین نمونه های اندیمشک و ایذه مشاهده شد. نتایج تجزیه به مولفه های اصلی و نتایج حاصل از تجزیه خوشه ایبا یکدیگر مشابه بودند و ضریب کوفنتیک 6/74 درصد به دست آمد. نتایج نشان داد که نشانگر های RAPD وISSR برای بررسی تنوع ژنتیکی بین جمعیتی این توده مناسب هستند.
    کلیدواژگان: آویشن شیرازی، تنوع ژنتیکی، نشانگرمولکولی، تجزیه خوشه ای
  • علی جعفری مفیدآبادی *، منصوره کمندلو، عبدالرحیم نظری صفحات 114-120
    ضرورت تکثیر تجاری گیلاس وحشی به روش سنتی و یا ریزازدیادی در احیاء و توسعه جنگل ها و تهیه پایه برای پیوند ارقام تجاری گیلاس احساس می شود. برای ریزازدیادی و به منظور تهیه بافت نورسته (شاخسار درون شیشه ای) به عنوان هسته اولیه و شروع چرخه تکثیر، کشت جنین بالغ مورد استفاده قرار گرفت. برای تهیه شاخسار، جنین های بالغ ایزوله شده به محیط کشت MS حاوی غلظت 30 و 60 گرم در لیتر ساکارز منتقل شد. تجزیه وتحلیل میانگین داده ها بر اساس آزمون t نشان داد که اختلاف معنی داری بین غلظت های ساکارز در سطح 5% وجود نداشت. محیط کشت MS حاوی 30 گرم در لیتر ساکارز موجب 4/70% جوانه زنی جنین و موجب بیشترین رشد رویشی شاخسار پس از جوانه زنی شد. تجزیه وتحلیل داده ها بر اساس طرح فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی برای بیان اثرات هورمون های رشد گیاهی در پرآوری، بیانگر وجود اختلاف معنی دار در سطح یک درصد بین هورمون های رشد گیاهی برای اندازه طول ساقه و برای تعداد ریزنمونه قابل استحصال است. محیط کشت MS حاوی 4 میلی گرم در لیتر BA و 2/0 میلی گرم در لیتر IBA موجب بیشترین رشد طولی ساقچه (86/5 سانتی متر) و بیشترین تعداد ریزنمونه (87/3) در چرخه پرآوری شد. گیاهچه ها در ارتفاع 4 تا 5 سانتی متری پس از تهیه ریزنمونه (قطعات تک جوانه) در محیط کشت MS فاقد هورمون های رشد گیاهی ریشه دار شده و پس از انجام سازگاری تدریجی موفق، به گلخانه منتقل شدند.
    کلیدواژگان: بافت نورسته، گیلاس وحشی، تولید پایه، ریزازدیادی و جنگل کاری
  • یوسف علی سعادت *، علیرضا عباسی صفحات 121-131
    زرشک بی دانه (Berberis vulgaris var. asperma) یکی از گیاهان دارویی ایران است و کمبود نهال سالم از مشکلات موجود توسعه کشت این گیاه ارزشمند است. این پژوهش به منظور دستیابی به روش سریع و آسان برای ریزافزایی زرشک بی دانه انجام شد. در چندین آزمایش تاثیر تنظیم کننده های رشد گیاهی مختلف، مواد ژله ای کننده مختلف محیط کشت و منابع مختلف کربوهیدرات بر رشد درون شیشه ای این گیاه بررسی شد. براساس نتایج حاصل مشخص شد که قطعات شاخه نیمه خشبی ساقه دارای 2-1 جوانه جانبی مناسب ترین ریزنمونه برای استقرار درون شیشه ای زرشک بی دانه است. گندزدایی مواد گیاهی منشا گرفته از درختان بالغ با غوطه ور کردن در محلول دو گرم در لیتر قارچ کش بنومیل به مدت یک ساعت و بعد محلول یک درصد هیپوکلریت سدیم تجاری به مدت 15 دقیقه و در پایان سه بار آبشویی با آب مقطر سترون انجام شد. محیط کشت نیمه جامد شده با فیتاژل در مقایسه با دیفکوباکتوآگار و آگارژل برای تولید شاخساره برتری معنی دار نشان داد. افزودن سه گرم در لیتر زغال فعال به محیط کشت موجب کنترل قهوه ای شدن محیط کشت و بافت های گیاهی، افزایش زنده مانی و رشد درون شیشه ای شد. محیط کشت DKW دارای دو میلی گرم در لیتر BA، 5/0 میلی گرم در لیتر IBA و دو میلی گرم در لیتر GA3 و نیمه جامد شده با 5/2 گرم در لیتر فیتاژل برای رشد درون شیشه ای زرشک بی دانه مطلوب بود و برای تولید شاخساره توصیه می شود. ریشه زایی در دو مرحله جداگانه انگیزش ریشه در حضور اکسین با غلظت زیاد و بعد انتقال شاخساره ها به محیط کشت بدون تنظیم کننده رشد برای نمو ریشه ها اجرا شد، اما ریشه زایی مشاهده نشد و به پژوهش های بیشتر نیاز است.
    کلیدواژگان: استان فارس، بنزیل آدنین، ریشه زایی، ساکارز، فیتاژل، محیط کشت DKW
  • علی اشرف جعفری*، میثم فرجی، شهرام نخجوان، سهیلا افکار صفحات 132-142
    با توجه به بالا بودن عملکرد و کیفیت علوفه در گونه Agropyron pectiniforme از این گونه برای احیاء مراتع و تولید علوفه استفاده می شود. به منظور بررسی تنوع ژنتیکی جمعیت های این گونه، بذر 16 جمعیت از مناطق مختلف کشور جمع آوری شد و در ایستگاه تحقیقاتی البرز کرج در قالب طرح بلوک های کامل تصادفی در سه تکرار در سال های 84-1383 مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج تجزیه واریانس نشان داد که تفاوت بین جمعیت ها برای کلیه صفات در سطح احتمال 1 درصد معنی دار بود. جمعیت های زنجان 487، تبریز 707 و گرگان 7565 با عملکرد علوفه 96 لغایت 119 گرم در بوته و عملکرد دانه 25 تا 33 گرم در بوته از لحاظ هر دو صفت پرمحصول بودند که در بین آنها جمعیت های زنجان و گرگان زودرس بودند و جمعیت تبریز وزن هزار دانه بیشتری داشت. همبستگی بین عملکرد علوفه و بذر مثبت و معنی دار بود و هر دو صفت با ارتفاع بوته، تعداد ساقه و طول سنبله همبستگی مثبت و معنی دار داشتند. با استفاده از تجزیه خوشه ایبه روش Ward جمعیت ها به سه گروه تقسیم شدند که جمعیت های خوشه1 دیررس با عملکرد متوسط، جمعیت های خوشه 2 پرمحصول، متوسط رس و جمعیت های خوشه3 کم محصول و زودرس بودند. صحت گروه بندی جمعیت ها با استفاده پراکنش جمعیت ها بر اساس دو مولفه اصلی اول و دوم در تجزیه به مولفه های اصلی و همچنین فاصله ماهالانوبیس بین خوشه ها تایید شد. نتایج نشان داد که بیشترین فاصله ژنتیکی بین خوشه های 2 و 3 به دست آمد و به همین دلیل جمعیت های این دو خوشه به عنوان والدین هیبرید در تولید واریته های ترکیبی پیشنهاد شدند. جمعیت زنجان 487 با داشتن عملکرد بذر و علوفه بیشتر به عنوان جمعیت مطلوب معرفی شد. ضریب همبستگی منتل بین ماتریس فاصله های ژنتیکی جمعیت ها با فاصله جغرافیایی محل جمع آوری آنها معنی دار نبود. به طور کلی نتیجه گیری شد که صفات مورفولوژیکی حاوی اطلاعات مهمی برای حفاظت و بهره برداری از ذخائر ژنتیکی می باشند و می توان از آنها در برنامه های به نژادی گیاهی گونه A. pectiniformeدر آینده استفاده کرد.
    کلیدواژگان: Agropyron pectiniforme، تنوع ژنتیکی، تجزیه خوشه ای، صفات مورفولوژیکی
  • بهمن رهنمون، حمید حاتمی ملکی *، رضا محمدی، مجتبی نورآیین صفحات 143-154
    با هدف تعیین روابط بین عملکرد علوفه خشک و برخی صفات زراعی مرتبط با آن در جنس آگروپیرون، 31 جمعیت از سه گونه مختلف جنس آگروپیرون (A. desertorum، A. cristatum و A. elongatum) در قالب طرح بلوک های کامل تصادفی با 3 تکرار در مزرعه تحقیقاتی پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی شمالغرب و غرب کشور (تبریز) در سال های زراعی 94- 1393 ارزیابی شدند. ضرایب همبستگی نشان داد که عملکرد علوفه خشک در گونه A. elongatum با قطر تاج پوش همبستگی مثبت و با صفت تعداد روز تا گرده افشانی همبستگی منفی معنی دار داشت. در گونه های A. desertorum و A. cristatum نیز صفت عملکرد علوفه خشک، با تعداد ساقه همبستگی مثبت و با عرض برگ پرچم همبستگی منفی معنی دار داشت. با استفاده از تجزیه رگرسیونی گام به گام، در گونه A. elongatum، به ترتیب صفات قطر تاج پوشش و تعداد روز تا گرده افشانی و در گونه های A. desertorum و A. cristatum، صفات تعداد ساقه و طول خوشه وارد مدل شدند. تجزیه مسیر برای عملکرد علوفه خشک به عنوان متغیر تابع نشان داد که در گونه A. elongatum صفت قطر تاج پوش دارای اثر مستقیم مثبت (61/0) و صفت تعداد روز تا گرده افشانی اثر مستقیم منفی (46/0-) و در گونه های A. desertorum و A. cristatum، تعداد ساقه اثر مستقیم مثبت (73/0) و طول خوشه اثر مستقیم منفی (44/0-) بر متغیر تابع داشتند. یافته های این پژوهش نشان می دهد که در گونه A.elongatum، صفات قطر تاج پوش و تعداد روز تا گرده افشانی و در گونه های A. desertorum و A.cristatum، صفت تعداد ساقه تاثیر بیشتری در عملکرد علوفه خشک داشته و می توانند به عنوان شاخص در گزینش ژنوتیپ های مطلوب استفاده شوند.
    کلیدواژگان: آگروپیرون، عملکرد علوفه خشک، تجزیه رگرسیون، تجزیه مسیر
|
  • S. Alipour Amraei, A. Ismaili *, F. Nazarian Firouzabadi, A.M. Latifi Pages 1-11
    Papaver somniferum is one of the important commercial sources for several pharmaceutical alkaloids including the narcotic analgesics codeine and morphinane and the semi-synthetic drugs oxycodone, buprenorphine and naltrexone. One of the downstream genes in alkaloid biosynthesis pathway in the species is thebaine-6-O demetylase (T6ODM) that inverts thebaine and oripavine to codeinone and morphinone, respectively. In this study, a transient silencing construct based on virus-induced gene silencing (VIGS) technique was used to knockdown the T6ODM expression. In this regard, cDNA of T6ODM was prepared using specific primers and the results of reaction were sequenced for confirmation. Then, a part of resulted cDNA (silencing fragment) was selected for cloning in pTRV vector. The silencing construct was infiltrated to plant leaves via Agrobacterium tumefaciens. The presence of cp (coat proteine) gene of TRV vector was assayed by PCR and the positive TRV plants were screened for analysis of gene expression by semi quantitative and real-time PCR. Results of gene expression analysis showed that transgenic plants had a significant decrease in expression (with average amount of 83.71%), comparing to control plants.
    Keywords: Agrobacterium, Papaver, Real time-PCR, VIGS
  • D. Jafari, F. Dehghan Nayeri * Pages 12-22
    An anti-cancer drug called Taxol, or paclitaxel is one of the secondary metabolites of yewtree (Taxus bacatta). Taxol is one of the most important and most useful anticancer drugs in the treatment of lung cancer. Taxol prevents the depolymerization of microtubules and inhibits cell division in tumor tissues. JAMYC is a transcription factor from MYC family with a DNAbinding motif called bHLH. The gene involved in Taxol biosynthesis has been identified in other yew species. The aim of this study was isolation and cloning of TbJAMYC gene and bioinformatics analysis of its structure. Initially to obtain yew seedling, embryos were removed from seeds of the species and cultured on MS medium containing activated charcoal and ascorbic acid. Total RNA was extracted from the seedlings and cDNA was synthesized from extracted RNA. The gene of TbJAMYC was amplified by PCR from cDNA. Amplified fragment cloned in pTG 19 vector using TA cloning method and sequenced. Bioinformatics analysis was carried out by MODELLER and Pfam softwares. The cloning was confirmed by endonuclease digestion and sequencing. TbJAMYC bioinformatics analysis was carried out by Pfam and MODELLER softwares that revealed three-dimensional structure of the DNA binding domain. These analyzes showed that TbJAMYC protein is a member of MYC transcription factors family that binds to DNA and regulates gene expression by bHLH domain. TbJAMYC transcription factor involved in the biosynthesis of valuable anticancer Taxol drug. Hence Taxol biosynthesis pathway manipulation via genetic engineering can be a new way to increase production of the metabolite in yew plant.
    Keywords: bHLH, Bioinformatics analysis, MYC transcription factor, Taxol, Yew
  • H. Honari *, S.M. Etemad Aubi, F. Esmaili, M. Abdollahi Pages 23-31
    Soapwort (Saponaria officinalis L.) is a native plant to central and southern Europe. It is an important and rare plant species in Iran. The species has numerous applications in medicinal, agricultural and health fields. Saponins is one of the bioactive compounds in the species that is used in chemotherapy. Tissue culture is one of the ways of proliferation of the species that is used for production of active ingredients. Saponin has ten isoforms that are different to inhibition of translating ribosomes and cytotoxicity. SO6 is one of the isoforms of saponins. Presence of SO6 protein in soapwort callus was studied through plant tissue culture and different concentrations of growth regulators and environmental factors. After achieving success in tissue culture, protein was extracted from its callus and presence of SO6 protein was confirmed by western blot analysis and measured by ELISA. Results showed that seed germination was possible through using appropriate treatment and soapwort root callus had the highest amount of SO6 protein.
    Keywords: Callus, growth regulators, Saponaria officinalis L, SO6 protein
  • H. Mirzaie-Nodoushan *, J. Hosseinzadeh, S. Mehrpur, P. Panahi, D. Mehdifar Pages 32-43
    Persian oak (Quercus brantii Lindl.) with a vast habitat in Zagros mountain range, has a specific importance in Iran, based on economic, sociologic and environmental aspects. A complex of human and non-human factors caused to show genetic erosion in several plant populations of the species. Therefore, evaluation of genetic variation and architecture of plant population could be informative for forest managers and breeders. The research was performed to evaluate genetic potentials of a plant population of the species located in Lorestan provinces, west of Iran. Seed was collected randomly on twelve single plants to be used in assessment of the parent plants by a progeny test experiment. The seeds were evaluated as twelve half-sib and Full-sib families planted in a completely randomized block design with three replications. Biometric parameters were converted to genetic parameters using nested mating design model, by which genetic variance components and heritability values were estimated. The studied families showed a range of 6 to 92 percent establishment. Analysis of variance revealed significant difference between the parents based on all of the recorded traits. Majority of the variance components was observed between the studied families, for which heritability of the characters was also strong, varying between 57% on collar diameter, to 95% on leaf length. Therefore, the studied oak plant population has the capability to be used for selecting suitable materials for seed orchard establishment as well as performing other breeding projects.
    Keywords: Genetic structure, Genetic variation, Quercus brantii, seedling characteristics
  • M. Sedaghati *, M.H. Assareh, M.A. Ebrahimi, S.M. Hesamzadeh-Hejazi, H. Sobhanian Pages 44-52
    Urtica dioica L. is dioecious plant and cross pollination with active components and special medicinal properties with economic values. Due to high level of heterozygosity of the species, homogeneity in fiber production and harvesting of selected plants is not guaranteed by seed propagation. For this reason micropropagation and asexual proliferation is suggested for production of selected plants. For micropropagation of the species, apical buds of Nettle shoots were used as explant. After sterilization, the explants were transferred into MS medium containing BAP, 2iP and IBA. Then, to evaluate the culture conditions, the explants were located on culturing mediums (MS, DKW, WPM) with different concentrations of growth regulators (IBA, 2,4-D, BAP, KIN, 2iP , TDZ) in a factorial experimental model based on a completely randomized design with three replications. The best medium for shooting initiation was WPM culture. Between rooting treatments, the best root number and secondary roots belonged to KIN (0.5 mgl-1) IBA (0.5 and 1 mgl-1) and BAP (0.5 mgl-1) IBA (0.5 mgl-1) treatments, respectively. Then rooted plantlets transferred to the greenhouse and successfully were acclimatized (55.5%).
    Keywords: Micropropagation, plant growth regulator, Urtica dioica
  • L. Mirjani, A. Salimi *, M. Matinizadeh, K. Razavi, M. Shahbazi Pages 53-62
    Satureja khuzistanica Jamzad is an endemic species of Iran. The species is an endangered and valuable medicinal plant. In order to propagate through micropropagation, lateral buds were collected from Lorestan province, region of Pol of Dokhtar. The best treatment of sterilization of the explants was 0.1% HgCl2 for 6 minutes. The best medium for shoot regeneration was MS with BA, 2iP and IBA 0.3, 0.3 and 1 mg/l, respectively. Applying 12 different treatments, the mentioned medium was better than other treatments in term of the coefficient of elongation, leaf elongation and leaf greenness. The best medium for root regeneration was MS with 1 mg/l IBA and 0.1 mg/l NAA. It initiated the highest number of primary and secondary roots. Various combinations of different soils were evaluated for survival during the acclimatization, and sand: soil: peat: perlite at a ratio of 1: 1: 1: 1 showed the highest percentage of survival and growth. The best propagation method of the species was developed and the propagated plants could be transplanted into the habitat of the species.
    Keywords: In vitro regeneration, Micropropagation, Plant growth regulator, Satureja khuzistanica
  • M. Emam *, L. Mirjani, M. Hesamzade Hejazi, M.A. Soltanipoor Pages 63-70
    Zhumeria majdae is one of the most important aromatic plant species from Lamiaceae family. The valuable species has medicinal and industrial applications. It is an endemic and endangered species of Iran. Therefore, tissue culture techniques are proposed for propagation and conservation purposes of the species. Usual regeneration of the species is by seed. Apical buds of seedlings from Hormozgan genotypes were sterilized by HgCl2 0.1% solution for 5 minutes during spring season. The best medium for shoot proliferation was WPM containing BA (0.5 mg/l), 2iP (0.3) and IBA (0.1 mg/l). The highest rooting of the shoots was obtained by WPM supplemented with 1 mg/l of IBA. The plants were acclimatized in greenhouse after transferring in soil. The protocol of this research could be used for culture and developmental programs of the species in its original habitat.
    Keywords: Endemic, micro propagation, Tissue culture, Zhumeria majdae L
  • S. Salahi Sadr, H. Zakizadeh *, M.R. Naghavi, J.A. Olfati Pages 71-83
    Fritillaria raddeana is one of the most fascinating wild flowers, belonging to Lilliaceae family, native to Iran. It is an important ornamental-medical bulbous plant, tolerant to arid conditions and stony slopes but facing extinction. There have been very few reports exist, so any studies on the species would be of great importance. Regardless of mutation occurrence, successful regeneration will be a prerequisite for further researches that must be done on the endangered plant species. This research presents an in vitro callus induction and indirect regeneration of F. raddeana via culturing petal and leaf. The leaf (before flowering) and petal (green to yellow flower buds) explants excited from plant and surface sterilized and were cultured on MS media containing different concentrations of Auxin and Cytokinin. The explants were first kept at darkness and 18ºC for callus induction, then were transferred to light condition with the same temperature. The temperature was raised to 20ºC, when the calli sub cultured into regeneration media. Although due to the low amount of bacterial and fungal contamination, conservation of parent plants, adequate and ready available explants, both petals and leaves are acceptable explants, among them petal showed better and quicker response to variable plant growth regulators. The best medium for callus formation (82.66%) and indirect regeneration (36.66%) via petal explants was MS medium supplemented with 2 mgl-1 TDZ and 0.5 mgl-1 IBA. Therefore, the mentioned plant growth regulators were more suitable than the others for indirect regeneration of F. raddeana.
    Keywords: Callus formation, endemic plant, indirect regeneration, plant growth regulators, wild species
  • M. Babaeiyan, D. Azadfar *, M.H. Pahlevani, Z. Saedi, M.H. Arzanesh Pages 84-100
    Amygdalus scoparia spach. a multi-purpose species which is growing in most of vegetation regions of Iran. Knowledge of genetic variability and heritability is essential prerequisite for conservation, forest development and sustainable use of forest plants. Genetic parameters on early growth were estimated in open-pollinated combined provenance-progeny tests. The experiment was conducted based on a nested model using randomized complete block design with 7 population, 10 mother trees per population 7 individuals per subplot and 3 replications in nursery of Kohmareh-Sorkhi of Fars (1660 m a.s.l.). Significant differences among the populations and mother trees within populations were observed for all of the studied traits, except for the taproot length among mother trees within populations. Evaluation of components of variance showed that the population effects (ranging from %5.9 to % 34.2) contributed to total variance more than mother trees within populations effects (ranging from%1.8 to %11.1). Additive genetic variation coefficient in populations varied from 0 to 58.6%. In general, Khonj and Kavar populations performed better growth. Heritability was low and not yet stable for some traits in some populations. Therefore, selection should be postponed until the heritability values reach to relatively high and stable values.
    Keywords: Amygdalus scoparia Spach, combined provenance-progeny tests, heritability, seedling traits
  • H. Bibak *, K. Aghaabbasi Pages 101-113
    Assessment of genetic diversity and germplasm classification of plant species are important activities in plant improvement and management of genetic resources. Regarding observed variation on various traits of Zataria multiflora Bosis. random amplified polymorphic DNA (RAPD) and inter-simple sequence repeat (ISSR) markers were used to assess genetic diversity of the species in Iran. Leaves were collected on thyme plants of 15 different regions of Kerman,
    Sistan and Balochistan, Boushehr, Fars, and Khuzestan provinces. Leaf DNA extraction was carried out by cetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB) method with small modifications. Ten RAPD markers and 10 ISSR markers with sharper bands in polymerase chain reaction (PCR) were used for data analysis. NTSYS-pc software and dice similarity coefficient, as well as Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Averages (UPGMA) were used to draw the related dendrogram. Cophenetic correlation coefficient was calculated and a two-dimensional graph was created based on principle component analysis (PCA) results. Range of the bands produced by the primers varied from 120 to 3100bp. The 15 selected regions were classified into three separate groups. The established clusters were in a good harmony with geographical conditions. Entirely the markers produced 207 bands with polymorphism percentage of 86.9. The results of the dice similarity coefficient produced by NTYSIS suggested that genetic similarity of thyme varied between 0.4390–0.8460. The most genetic similarity was observed between Andimeshk and Eizeh samples and the least similarity was observed between Iranshahr and Jiroft samples. Results of principle components analysis and cluster analysis were similar. Cophenetic correlation coefficient was 74.60%. The results suggested that RAPD & ISSR markers are useful for investigating genetic variability of Zatraia multiflora germplasm.
    Keywords: cluster analysis, genetic diversity, molecular markers, Zataria multiflora
  • A. Jafari Mofidabadi *, M. Kamandloo, A.R. Nazari Pages 114-120
    Propagation of Pronus avium L. through conventional micropropagation is essential for forest development and production of scion for grafting of commercial Pronus varieties. For micropropagation and production of juvenile tissue as an initial source of proliferation, mature embryo explants were used. For in vitro shoots preparation, isolated embryos of mature trees were transferred into MS medium containing 30 and 60 g/l sucrose. There were no significant differences between MS media containing 30 and 60g/l for percentage of embryo germination using t-Student test. Factorial analysis of collected data for further shoot proliferation indicated that there were highly significant differences between the used growth regulators for in vitro shoot length and number of produced explantsýatýα=0.01ýlevel. The highest average shoot length (5.86 cm) and the highest mean number of explants production were observed on MS medium supplemented with 4 mg/l BA and 0.2 mg/l IBA. Plantlet at 4 to 5 cm in height were rooted in MS hormone free medium and after successful acclimatization transferred to a green house.
    Keywords: Juvenile tissue, micro propagation, Pronus avium L, Scion production, Reforestation
  • Y.A. Saadat *, A. Abbasi Pages 121-131
    Berberis vulgaris var. asperma, is a medicinal plant of Iran and lack of healthy vigorous seedlings is the main limitation of barberry cultivation. This research was carried out to develop a suitable technique for mass micropropagation of the species. Effects of different plant growth regulators, different gelling agents and different carbon sources on in vitro growth of barberry were studied in several experiments. Based on the results of the experiments, nodal segments containing 1-2 axillary buds of semi-hardwood shoots were the best explants for establishment of clean in vitro cultures. Surface disinfection of plant materials originated from adult trees was performed with immersion in 2 gl -1 of Benomyl solution for one hour, then 1% solution of commercial bleach for 15 minutes and rinsed three times with sterile distilled water. Explants cultured on media solidified with Phytagel were significantly better than the media with DifcoBacto agar and Agargel for shoot production. Addition of 3 gl -1 activated charcoal resulted in control of nutrient medium and explants browning, improvement of survival and in vitro growth of the explants. DKW medium containing 2 mgl 3 gl -1 activated charcoal and solidified with 2.5 gl -1 -1 BA, 0.5 mgl -1 IBA , 2 mgl Phytagel was optimum for in vitro growth of barberry and recommended for shoot multiplication of the species. Rooting experiment was carried out using a two phase procedure, root induction in media with high concentration of IBA, followed by transferring to growth regulators free medium for root development. No rooting was observed and further research is needed.
    Keywords: BA, DKW nutrient medium, Fars province, Phytagel, rooting, sucrose
  • A.A. Jafari *, M. Jafari, S. Nakhjavan, S. Afkar Pages 132-142
    Agropyron pectiniforme having moderate to high yield and quality traits is cultivated for pasture regeneration and forage production in rangelands of Iran. In order to study genetic variability in Agropyron pectiniforme based on morphological traits, 16 populations were examined in the field trial using a complete block design with three replications during 20042005 in Karaj, Iran. Data were collected on heading date, plant height, tiller number, spike length, forage yield, seed yield and thousand grain weights. Results showed significant differences between the populations for all of the recorded traits (P≤0.01). Populations Zangan487, Tabriz-707 and Gorgan-7565 with averaged values of 96 to 119 g/plant and 25 to 33 g/plant had higher forage and seed production, respectively. Among them, Zangan-487 had early maturity date and Tabriz-707 had higher seed thousand grain weights. Phenotypic correlation between forage and seed yield was positively significant (P
    Keywords: Agropyron pectiniforme, cluster analysis, Genetic variation, morphological traits
  • B. Rahnemoun, H. Hatami Maleki *, R. Mohammadi, M. Nouraein Pages 143-154
    In order to determine relationship among forage dry matter yield and soeveral associatedagronomic traits in Agropyron genus, 31 populations of three Agropyron species (A. desertorum, A. cristatum and A. elongatum) were evaluated in a randomized complete block design (RCBD) with three replications in research farm of Agricultural Biotechnology Research Institute of Northwest and West region of Iran- Tabriz. Correlation coefficients analysis showed that dry forage yield in A. elongatum, had significant positive correlation with canopy diameter and negative correlation with number of days to pollination. For A. desertorum and A. cristatum dry forage yield had also significant and positive correlation with number of stems and negative correlation with flag leaf width. Using stepwise regression analysis, in A. elongatum, canopy diameter and number of days to pollination and in A. desertorum and A. cristatum, number of stem and panicle length were entered into regression model. Path analysis for dry forage yield as a dependent variable, revealed that in A. elongatum canopy diameter had positive direct effect (0.61) and number of days to pollination had negative direct effect (-0.46) and in A. desertorum and A. cristatum, number of stems had positive direct effect (0.73) and panicle length had negative direct effect (-0.44) on dependent variable. Results showed that canopy diameter and the number of days to pollination in A. elongatum, and the number of stem in the A. desertorum and A. cristatum, had great effect in determining forage dry matter yield and therefore, could be recommended as indices in screening suitable genotypes.
    Keywords: Agropyron genus, forage dry matter yield, path analysis, regression analysis