جایگیری درون هسته ای پروتئین Agrobacterium VirD2 در مدل ژنتیکی Saccharomyces cerevisiae

در طبیعت Agrobacterium tumefaciens پس از تماس با سلول های زخمی گیاهی از طریق سیستم ترشحی نوع IV بخشی از پلاسمید مولد تومور خود، T-DNA، و تعدادی پروتئین بیماری زایی را بدرون سلول گیاه می فرستد. پروتئین بیماری زایی VirD2 که بصورت کووالان به انتهای 5 ملکول T-DNA می چسبد در انتقال و ورود این ملکول بدرون هسته و ژنوم گیاهان میزبان نقش دارد. A.tumefaciens قادر به تراریخت موجودات غیرگیاهی نیز می باشد. وجود پروتئین VirD2 فعال برای تراریخت اگروباکتریومی سلول های گیاهی و غیرگیاهی ضروری است. در این پژوهش با استفاده از پروتئین فلورسنت سبز (yGFP)، جایگاه درون سلولی پروتئین VirD2 در سلول های قارچ مدل ژنتیکی Saccharomyces cerevisiae مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور، ابتدا ژن virD2 توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر و در پلاسمید pGBDKc1 کلون شد. سپس ژن مذکور بدرون جایگاه های کلونینگ وکتورهای pUG34، pUG35 و pUG36 که حامل ژن yGFP تحت کنترل پروموتر MET25 می باشند کلون شد. انتقال ژن به استرین های اکسوترف S. cerevisiae بروش شیمیایی استات لیتیوم انجام شد. نتایج مطالعات فلورسنس میکروسکوپی نشان داد که VirD2 متصل شده از پایانه ی آمینویی ش به پایانه ی کربوکسیلی پروتئین فلورسنت سبز، بیان شده از پلاسمیدهای pUG34 و pUG36، درون هسته ی سلول میزبان S.cerevisiae جای می گیرد. این یافته، اهمیت توالی هسته یاب (NLS) پایانه ی کربوکسیلی پروتئین VirD2 در جایگیری درون هسته ای این پروتئین در سلول غیرگیاهی مخمر را می-رساند.