کلون و بیان پروتئین نو ترکیب 28 کیلو دالتونی غشا خارجی بروسلا ملیتنسیس

بروسلوز یک بیماری زئونوز بوده و در بسیاری از کشورهای جهان از جمله ایران بعنوان بیماری بومی محسوب می شود. کنترل این بیماری وابسته به پیشگیری از موارد جدید بیماری و تشخیص بیماری می باشد. بررسی آنتی ژن های مختلف و فاکتورهای بیماریزایی سلول بروسلا، در پیشبرد اهداف پیشگیری، تشخیص و ریشه کنی این بیماری دارای اهمیت بالایی می باشد. در این تحقیق، پروتئین نوترکیب 28 کیلودالتونی غشای خارجی (omp28) بروسلا ملی تنسیس مورد بررسی قرار گرفته است.
ابتدا ژن 28 کیلودالتونی نوترکیب (omp28) بروسلا ملی تنسیس با آنزیم پرایم استار 21 تکثیر و سپس درون وکتور pJET 1.2 کلون شده و تعیین توالی گردید. ژن پروتئین هدف (omp28) از وکتور پلاسمیدی که مورد تایید قرار گرفته و بوسیله آنزیم های محدودالاثر طراحی شده، از روی پرایمرها خارج و در وکتور بیانی (+)pET8a کلون شد. پلاسمید حاوی ژن پروتئین هدف، در سویه اشریشاکلی بی ال 21 _ (دی ای 3) ترانسفورم شد و تولید پروتئین نوترکیب با ای پی تی چی القا و با روش اس دی اس پیج تایید شد.
پس از واکنش زنجیره ای پلیمراز، ژل الکتروفورز 1% تکثیر ژن پروتئین 28 کیلودالتونی غشای خارجی (omp28) را با سایز مناسب تایید نمود. ترانسفورماسیون وکتورهای کلون شده در دو میزبان اشریشیاکلی دی اچ پنج الفا و اشریشیاکلی بی ال 21 (ای ای 3) نیز با استفاده از واکنش زنجیره ای پلی مراز از روی کلونی ها مورد تایید قرار گرفت. بیان پروتئین نوترکیب 28 کیلودالتونی غشای خارجی (omp28) بروسلا ملی تنسیس با وزن مولکولی صجیج در میزبان اشریشیاکلی بی ال 21 انجام گرفته است. این پروتئین می تواند یک آنتی ژن مناسب برای تحقیقات واکسن و تشخیص سرولوژیک باشد.
با تخلیص نوترکیب حاصله و ارزیابی ایمنی زایی آن می توان از آن به عنوان یک کاندید واکسن استفاده نمود.