همسانه سازی و بررسی بیان موقت پیشبر pat1 گیاه سیب زمینی با استفاده از سیستم اگرواینفیلتریشن

پیشبرها یکی از عناصر کلیدی مهندسی ژنتیک برای هدفمندی بیان ژن ها محسوب می شوند. به منظور بیان اختصاصی ژن در غده های سیب زمینی عمومی ترین پیشبر مورد استفاده پیشبر Patatin است. پاتاتین گروهی از گلیکوپروتئین ها هستند که به وسیله یک خانواده چندژنی رمزسازی می شوند. این پروتئین ها بیش از 40% پروتئین های محلول در غده سیب زمینی را به خود اختصاص می دهند. پیشبرهای کلاس I به طور عمده مسئول بیان پاتاتین های غده بوده و بنابراین الگوی بیان اختصاصی برای غده داشته و در بخش بافت پارانشیمی آن به مقدار زیاد وجود دارند. هدف از این تحقیق همسانه سازی پیشبر اختصاصی غده سیب زمینی (پاتاتین کلاس I (pat1)) و بررسی بیان اختصاصی آن می باشد. پس از استخراج DNA ژنومی از گیاه سیب زمینی، پیشبر Pat1 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی همسانه سازی شد. قطعه مورد نظر با دو آنزیم برشی Bam HI و Hind III جدا و خالص سازی شده و جایگزین پیشبر دایمی CaMV35S در ناقل دوگانه pBI121 گردید. پلاسمید نوترکیب به روش شوک حرارتی به Agrobacterium tumefaciens سویه LBA4404 منتقل گردید. با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن بیان اختصاصی ژن gus در بافت های گیاه سیب زمینی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل نشان داد که در مقایسه با پیشبر CaMV35S، پیشبر PatI نیز با کارایی بالایی باعث بیان ژن gus در غده ها می شود.