کلون سازی و بیان پلاسمی L- آسپاراژیناز II در باکتری اشریشیاکلی

ال-آسپاراژیناز (تیپ II) با فعالیت ضدتوموری به طور طبیعی توسط باکتری اشریشیا کلی تولید می گردد. این آنزیم با تبدیل ال- آسپاراژین موجود در خون به آمونیوم و آسپارتیک اسید، در درمان لوکمیای لمفوبلاستیک حاد (ALL) مورد استفاده قرار می گیرد. هدف از این پژوهش، تولید سیتوپلاسمی آنزیم ال- آسپاراژیناز II و کلون سازی ژن آن بدون سیگنال پپتید و حذف متیونین ابتدایی بود.
در ابتدا ژن ال- آسپاراژیناز II با روش PCR از اشریشیا کلی سویه K12 جداسازی و درون وکتور بیانی pET32 مهندسی شده کلون گردید. توالی یابی و ارزیابی بیان ژن مورد نظر مطابق با روش های متداول به انجام رسیدند. سپس پلاسمید نوترکیب حاوی ژن متیونین آمینوپپتیداز خالص سازی گردید و با روش شوک حرارتی به درون باکتری تولید کننده آسپاراژیناز نوترکیب انتقال داده شد.
بیان ال- آسپاراژیناز سیتوپلاسمی بیش از نوع پری پلاسمی بود. همچنین با توجه به بیان بالای آنزیم متیونین آمینوپپتیداز در میزبان بیانی اشریشیا کلی Origami، انتظار می رود که این آنزیم به طور موثری توانسته موجب حذف متیونین ابتدایی ال- آسپاراژیناز شود.
نتایج به دست آمده در این مطالعه در راستای معرفی میزبان با قابلیت بیان بالای ال- آسپاراژیناز نوترکیب در سیتوپلاسم، می تواند گامی بزرگ در مسیر درمان لوکمی لنفوبلاستیک حاد و نیز افزایش تولید این آنزیم در صنعت محسوب گردد.