شناسایی اختصاصی استافیلوکوک های مقاوم به متی سیلین با استفاده از تکنیک Multiplex PCR

استافیلوکوکوس اورئوس یکی از پاتوژن های خطرناکی است که عامل بسیاری از بیماری های عفونی می باشد. به همین دلیل تشخیص، کنترل، شناسایی دقیق و درمان این باکتری بسیار حایز اهمیت می باشد. هدف از این مطالعه، راه اندازی روشی سریع با تکنیک Multiplex PCR برای تشخیص به موقع جهت ارائه ی راهکار لازم برای مقابله با باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بود.
در این مطالعه از 225 نفر از کارکنان شاغل در بیمارستان های آموزشی و درمانی شهر زنجان به روش تصادفی نمونه گیری از قسمت قدامی بینی انجام شد. پس از انجام تست های شناسایی و تایید باکتری مورد نظر، جهت انجام آنتی بیوگرام از محیط کشت مولر هینتون آگار به روش دیسک دیفیوژن Kirby-Bauer استفاده شد. پس از استخراج DNA به روش جوشان و روش فنل کلروفورم، ژن های femA، mecA و Sa442 (قطعه ای از کروموزوم اختصاصی باکتری) به طور هم زمان با دستگاه ترموسایکلر تکثیر شد و پس از انجام ژل الکتروفورز و رنگ آمیزی با SyberGreen DNA باندها شناسایی شدند.
از 225 نمونه، در 208 نمونه رشد کلنی مشاهده شد. از 208 کلنی، 203 نمونه گرم مثبت، 201 نمونه کاتالاز مثبت و 71 نمونه کوآگولاز مثبت گزارش شد. نتایج آنتی بیوگرام نشان داد که باکتری استافیلوکوکوس اورئوس به آنتی بیوتیک های اگزاسیلین و پنی سیلین بیشترین مقاومت و به آمیکاسین و ونکومایسین بیشترین حساسیت را دارد. با بهینه سازی شرایط PCR (Polymerase chain reaction) ژن های femA، mecA و Sa442 در یک میکروتیوب به صورت Multiplex تکثیر شدند.
روش Multiplex PCR به عنوان یک تست سریع و دقیق در مقایسه با روش دیسک دیفیوژن می تواند در شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس های مقاوم به متی سیلین کمک کننده باشد.