همسانه سازی و بیان قسمت ایمنی زای اگزوتوکسین A از سودوموناس آئروژینوزا

سودوموناس آئروژینوزا میکروارگانیسم فرصت طلبی بوده که به یکی از عومل اصلی عفونت های بیمارستانی در سراسر جهان تبدیل شده است. اگزوتوکسین A یک آنزیم خارج سلولی است که توسط اغلب سویه های بالینی سودوموناس آئروژینوزا ترشح می شود. اگرچه پاتوژنز بیماری های ناشی از سودوموناس پیچیده است، ولی شواهد کلینیکی و تجربی فراوان نشان دهنده ارتباط اگزوتوکسین A با موارد ابتلا و مرگ و میر ناشی ازعفونت های سودوموناسی است. در مطالعه حاضر، یک قطعه ایمنی زای 490 جفت بازی شامل دومین انتقال دهنده و دومین 1b از اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا سویه PAO1 توسط PCR تکثیرداده شد. محصول PCR در اشرشیا کلی DH5α کلون گشت و سپس در اشرشیا کلی BL21 با استفاده از وکتور پلاسمیدی (pET28a) بیان شد. وزن مولکولی پلی پپتید موردنظر در ژل SDS - PAGE، 18 کیلو دالتون تعیین شد. نتایج PCR و colony PCR تایید کننده صحت همسانه سازی دومین ایمنی زای اگزوتوکسین A بود. بررسی موقعیت پلی پپتید کلون شده درالکتروفورز عمودی با استفاده از ژل SDS - PAGE نشان داد که پلی پپتید مورد نظر توسط اشرشیاکلی به فضای پری پلاسمی تراوش می شود. از آنجایی که حضور توکسین کامل برای ایجاد پاسخ های ایمنی ضروری نیست واین پلی پپتید نوترکیب از خاصیت آنتی ژنیک برخوردار است، بنابراین ممکن است به عنوان واکسن موثری در پیشگیری ازعفونت های ناشی از سودوموناس عمل کند.