کلونینگ، بیان و ارزیابی عملکرد ژن PprI داینوکوکوس رادیودورانس در اشریشیا کلی

ژن PprI یکی از ژن های جدید شناخته شده در باکتری داینوکوکوس رادیودورانس می باشد که نقش اساسی در ترمیم DNA و مقاومت این باکتری نسبت به اشعه ماورای بنفش دارد. هدف این مطالعه کلون، بیان و بررسی خصوصیات ژن PprI در اشریشیاکلی می باشد.
ژن PprI باکتری داینوکوکوس رادیودورانس در حامل کلونینگ pGEM به صورت سنتتیک ساخته شده و در وکتور pET21a ساب کلون گردید. حامل پلاسمید بیانی pET21a حاوی ژن PprI در اشریشیاکلی سویه Origami ترانسفورم گردید و بیان پروتئین با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. هم چنین میزان مقاومت به اشعه UV-C در باکتری اشریشیا کلی نوترکیب تعیین شد.
در این مطالعه وکتور pET21a حاوی ژن PprI به همراه دم انتهایی هیستیدینی ساخته شد و شرایط بهینه برای بیان پروتئین نوترکیب PprI تعیین گردید. همچنین اشریشیا کلی نوترکیب نسبت به سویه فاقد ژن PprI به اشعه UV-C مقاوم تر شده بود.
نتایج این مطالعه نشان می دهد که پروتئین نوترکیب PprI می تواند گزینه مناسبی به عنوان پروتئین مقاوم به پرتو باشد. همچنین می توان پروتئین تولیدشده را خالص سازی کرده و میزان مقاومت به اشعه UV-C را در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی نیز بررسی نمود.