کلونینگ و تعیین توالی ژن کد کننده لیپوپروتئین سطحی LipL41 در باکتری لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار گریپوتیفوزا

لپتوسپیروزیس یک بیماری عفونی می باشد که توسط سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا ایجاد می شود. افزایش ارتقای کیفی روش های کاربردی و معتبر در تشخیص این بیماری و همچنین تولید واکسن نوترکیب، نیاز به آنتی ژن های اختصاصی دارد که در بین سرووارهای بیماریزای لپتوسپیرا یکسان و مشابه است. پروتئین های غشای خارجی لپتوسپیرا (OMPs)، آنتی ژن های موثری می باشند که قادر به تحریک پاسخ ایمنی مشخص در دوره عفونت می باشند. در بین این آنتی ژن ها، LipL41 یک لیپو پروتئین ایمونوژنیک است که تنها در سرووار های بیماریزا وجود دارد بنابراین می توان آن را به عنوان کاندیدای مناسبی در تهیه واکسن موثر و کارآمد و همچنین در روش های تشخیصی در نظر گرفت. به منظور تعیین میزان حفاظت شدگی ژن lipL41، این ژن در لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار واکسینال و بومی گریپوتیفوزا کلون و تعیین توالی گردید.
لپتوسپیرا اینتروگانس سرووار واکسینال و بومی گریپوتیفوزا جهت تلقیح در محیط کشت انتخابی(EMJH) مورد استفاده قرار گرفت و استخراج DNA ژنومی به روش استاندارد فنل کلروفرم انجام گردید. ژن lipL41 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی تکثیر و در وکتور pTZ57R/T کلون گردید و به سلول های مستعد شده E. coli سویه (Top10) انتقال داده شد. سپس پلاسمید نوترکیب استخراج و تعیین توالی گردید. سکانس های مرتبط به منظور آنالیز همولوژی با سکانس های ثبت شده در بانک ژنی مقایسه شدند.
محصول PCR ژن lipL41 یک قطعه 1065جفت بازی بود. که این قطعه در سرووار غیر بیماریزا L. biflexa مشاهده نگردید. بررسی توالی نوکلئوتیدی نشان داد که قرابت نوکلئوتیدی ژن lipL41 بین سرووار واکسینال (RTCC2808) و سرووار بومی بیماریزای (RTCC2825) گریپوتیفوزا 100% بود.
نتایج این مطالعه نشان داد که ژن lipL41 با 95/9% تشابه یک ژن حفاظت شده در سرووارهای مختلف بیماریزا می باشد. از این رو ژن کلون شده در تحقیق حاضر را می توان با هدف بیان پروتئین نو ترکیب در تهیه واکسن نوترکیب موثر و کارآمد و در روش های تشخیصی لپتوسپیروزیس مورد هدف قرار داد.