بررسی ترکیب محیط کشت پیچیده برای بهبود تولید ایمونوتوکسین اونتاک بوسیله سویه اشریشیاکلی نوترکیب

در سال های اخیر به منظور درمان بسیاری از بیماری ها از جمله سرطان به روش های زیستی روی آوردند که یکی از پر کاربردترین این روش ها استفاده از پروتئین های نوترکیب می باشد. ایمونوتوکسین اونتاک یک داروی ویژه برای درمان سرطان جهت بیماران مبتلا به لوکمیا، لنفوما و ملانوما است. با توجه به رشد چشمگیر سرطان در جامعه امروزی، بومی سازی ساخت داروهای نوترکیب امری ضروری به نظر می رسد. در این تحقیق، بهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت پیچیده برای بیان ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک مورد بررسی قرار گرفت.
این تحقیق یک مطالعه آزمایشگاهی است. ترکیب محیط کشت، غلظت های مختلفIPTG به عنوان القاگر و زمان القاء در بیان ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک بهینه سازی شد. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی در طول موج 600 نانومتر و میزان بیان پروتئین توسط روش SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت.
محیط کشت پیچیده اصلاح شده حاوی: glucose: 6g/l، K2HPO4: 12.5g/l، KH2PO4: 2.3g/l، Yeast extract:20g/l، Tryptone: 10g/l به عنوان محیط کشت بهینه تعیین گردید. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت 0.1mM، در کدورت نوری 3=OD600nm تعیین شد. بیشترین مقدار تولید بیومس و بیان پروتئین هدف در محیط کشت بهینه سازی شده به میزان 5/5=OD600nm تعیین گردید.
استفاده از منبع کربن گلوکز در ترکیب محیط کشت پیچیده نسبت به محیط کشت LB بیان بهتری می دهد. همچنین، مقدار بیومس تولید شده نسبت به محیط کشت LB، 5/3 برابر افزایش نشان داد.