بررسی ایمنی زایی آنتی ژن های STxB و STxB-IpaD به صورت نازال در رت های آزمایشگاهی

باکتری های شیگلا و ایشرشیا کلی شایع ترین عامل اسهال است و واکسن موثری علیه آن ها تولید نشده است. پروتئین IpaD نقش مهمی در تهاجم، بیماری زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلاها دارد. یکی دیگر از فاکتورهای بیماری زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1 و E. coli O157:H7 انتروتوکسین شیگلا یا (STxB) می باشد. با ممزوج پروتئین IpaD با STxB می توان کاندیدای واکسن مناسب تهیه نمود. در این مطالعه تیتر آنتی بادی پروتئین های نوترکیب STxB-IpaD ممزوجی و STxB نازالی و ایمنی زایی آن ها در رت با یک دیگر مقایسه شده است.
در این مطالعه تجربی، وکتورهای (pET28-stxB)، (pET28-ipaD-stxB) از مرکز زیست شناسی دانشگاه امام حسین (ع)تهیه گردید. با ترانسفورم این وکتورها به درون باکتریcoli BL21 DE3.E، به وسیله PCR و برش آنزیمی تایید شدند. پروتئین های نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن مورد تایید قرار گرفتند. بیان ژن های STxB-IpaD ممزوجی و STxB تحت القای IPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی ژن های حاصل در چهار نوبت متوالی به صورت نازال به رت ها در گروه پنج تایی تجویز شدند. آنتی بادی پلی کلونال تولید شده در سرم رت ها اندازه گیری گردید.
نتایج الایزا نشان داد که آنتی بادی علیه آنتی ژن STxB در رت ها تولید شده و با ممزوج شدن IpaD به STxB میزان تیتر آنتی بادی نسبت به تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن STxB افزایش یافته است. رت های ایمن شده با آنتی ژن STxB توانستند تا 6 برابر LD50 و رت های ایمن شده با آنتی ژن STxB-IpaD تا 10 برابر LD50 شیگا توکسین E. coli O157:H7 را تحمل نمایند.
پروتئین حاصل از امتزاج ژن های IpaD و STxB، می تواند اثر ایمنی زایی آنتی ژن STxB را افزایش دهد. پروتئین های ممزوجی با پروتئین نوترکیب STxB را به صورت نازالی و بدون ادجوانت شیمیایی به عنوان کاندید مناسب برای تولید واکسن نوترکیب علیه انواع شیگلا و ایشرشیا کلی می توان توصیه نمود.