خالص سازی توکسین اپسیلون از سویه واکسینال کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ D با استفاده از کروماتوگرافی تبادل یون و ژل فیلتراسیون

باکتری کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ D در بره ها، گوساله ها، کره اسب ها، بچه خوک ها و جوجه ها باعث ایجاد بیماری انتروتوکسمی یا pulpy kidney می شود. هم چنین در انسان، عامل بیماری enteritis necroticans می باشد. مهم ترین توکسین تیپ D توکسین اپسیلون است. این توکسین به عنوان مهم ترین فاکتور ویرولانس باکتری کلستریدیوم پر فرنژنس تیپ D در بیماری زایی به شمار می رود. در مطالعه ی حاضر، عملیات خالص سازی توکسین اپسیلون با استفاده از تکنیک های مختلف کروماتوگرافی نظیر کروماتوگرافی تعویض کاتیون CM-Sepharose و ژل فیلتراسیون Sephadex-G100 با هدف ابداع روشی جدید و اقتصادی به منظور خالص سازی توکسین اپسیلون انجام شد. پس از کشت باکتریایی، MLD نمونه ی حاصل از کشت باعث مرگ موش ها تا رقت 8000/1 گردید. هم چنین نمونه ی کشت اولیه باعث مرگ سلول های MDCK در کشت سلولی شد. بهترین غلظت نمک سولفات آمونیوم جهت ترسیب و تغلیظ نمونه ی کشت باکتریایی 60 درصد تعیین شد. پس از عملیات ترسیب، تغلیظ و دیالیز، نمونه ی خام روی کروماتوگرافی تعویض کاتیون CM-Sepharose بارگذاری شد. توکسین اپسیلون در غلظت نمک 100 میلی مولار خارج گردید. توکسین اپسیلون بر اساس فعالیت توکسین در مراحل مختلف خالص سازی حدود 9/138 برابر خالص شد. وزن مولکولی این توکسین حدود 34 کیلو دالتون تعیین گردید. با توجه به یافته های این تحقیق، روش های استفاده شده در عملیات خالص سازی این توکسین مناسب می باشد و توکسین به دست آمده دارای میزان فعالیت و درجه ی خلوص مناسبی است.