کمیت سنجی مطلق رونویسی ژن اینترلوکین-4، اینترلوکین-10 واینترفرون- گامای موشی با روش Real Time PCR

مطالعه سایتوکاینها و برای ارزیابی پاسخهای ایمنی واکسنهای جدید بسیار مهم است. کمیت سنجی مطلق مبتنی بر رسم نمودار کالیبراسیون و تولید کنترل های استاندارد میباشد تا نتایج قابل اعتمادتری نسبت به سیستم های نسبی داشته باشد. در این مطالعه سه کنترل استاندارد برای سایتوکاینهای اینترلوکین 10، اینترلوکین4 و اینترفرون گاما به منظور انجام روش کمیت سنجی مطلق در مدل موشی ساخته شد. در این پژوهش تعداد 10 موش نژاد Balb/C با مایع کیست هیداتیک همراه با اجووان فروند بطور زیر جلدی سه بار با فاصله دو هفته به منظور القا سلولهایTh1، Th2ایمن شدند. سه جفت پرایمر اختصاصی جهت تکثیر اینترلوکین 4، اینترلوکین10 و اینترفرون گاما با استفاده از نرم افزار اولیگو طراحی شد. توالی های تکثیر شده از سه سایتوکاین دروکتور pTZ57R-T کلون شدند. پلاسمیدهای نوترکیب حاوی توالی های مورد نظر خالص شده و رقت های سریالی از آنها تهیه شد. واکنش Real time PCR در حضور سایبر گرین انجام شده نمودر استاندارد با نرم افزار7500 ABI SDS بر اساس غلظتهای سریال پلاسمیدهای نوترکیب ترسیم شد. نتایج این مطالعه نشان داد که این تست برای اندازه گیری میزان ترنسکریپشن سه سایتوکاین مورد مطالعه تا رقت کمتراز 0.01 پیکوگرم (حدودا 150 کپی) با راندمان بالا میتواند کارامد باشد. این تکنیک امکان بررسی کمی سایتوکاین های بیان شده بواسطه القا آنتی ژن را فراهم می کند.