ارزیابی بیان نوترکیب زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A متصل به یک پپتید نفوذ کننده به سلول
نویسنده:
چکیده:
سابقه و هدف
توکسین بوتولینوم تیپ A امروزه به طور گسترده ای به صورت تزریقی در درمان برخی اختلالات انقباضی ماهیچه هابه کار می رود.این مطالعه به منظور تولیدپروتئین نوترکیب حاصل از اتصال کوالان زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) به پپتید TAT(47-57)وهمچنین شرایط مناسببرای افزایشبیان و تخلیص این پروتئین انجام شد.مواد و روش ها
در این مطالعه بنیادی توالی نوکلئوتیدی زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A و پپتید TATاز بانک ژنی به دست آمد وسازه ژنی حاوی اینتوالی هاطراحی و ساخته شد. پس از کلون سازی در وکتور بیانی BL21 (DE3)E. coli القای بیان با استفاده از IPTG انجام گرفت.سپس شرایط بهینه دمایی و غلظت مناسب IPTGبرای بیشترین میزان بیان بر اساس تفاوت در شدت رنگ میان باندهای پروتئینی ژل درSDS PAGEتعیین شد. پروتئین نوترکیببا کمک ستون کروماتوگرافی حاوی نیکل (Ni-NTA) تخلیصشد.یافته ها
پروتئین کایمریک حاصل در شرایط معمول بیان (mM IPTG 1و دمای C ̊37) به صورت نامحلول تولید می شود. با بهینه سازی شرایط بیان (mM IPTG 5/0و دمای C ̊18)میزان 60% ازپروتئین کایمریک به صورت محلول تولید شد.نتیجه گیری
بر اساس نتایج این مطالعه با بیان پروتئین نوترکیب به صورت محلول پروتئین پیچش صحیح و در نتیجه فعالیت خود را به میزان زیادی حفظ کرده و نیازی به استفاده از ترکیبات دناتوره کننده برای باز کردن پیچش پروتئین و محلول سازی آن نخواهد بود.کلیدواژگان:
زبان:
فارسی
صفحات:
25 تا 30
لینک کوتاه:
magiran.com/p1490583
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یکساله به مبلغ 1,390,000ريال میتوانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.
In order to view content subscription is required
Personal subscription
Subscribe magiran.com for 70 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!