جداسازی متانوبروی باکتر اسمیتی از نمونه مدفوع انسان با استفاده از ژن اختصاصی rpoB

آرکی ها میکروارگانیسم های اکستروترموفیل هستند که سال ها تصور بر آن بود که تنها می توان آنها از محیط های با شرایط دشوار از قبیل آتشفشان ها ، اعماق اقیانوس های و دریاچه های پرنمک به دست آورد. اما امروزه مشخص شده است که دسته ای از این آرکی ها ساکن دستگاه گوارش موجودات زنده از قبیل پستانداران، سخت پوستان و انسان هستند. از مهم ترین سویه شناسایی شده آرکی ها در دستگاه گوارش، می توان بهMethanobrevibacter smithii اشاره کرد. در این مطالعه، برای اولین بار آرکی متانوژن به صورت بومی جداسازی شد.
در این مطالعه DNA آرکی از نمونه های مدفوع 20 فرد سالم با معیار های مورد نظراستخراج و سپس PCR آن در شرایط بهینه صورت گرفت، همچنین برای اطمینان از تکثیر ژن مورد نظر (rpoB) هضم آنزیمی توسط آنزیم محدودکننده انجام شد و در انتها نمونه ها در داخل E.coli(DH5α) کلون و تعیین توالی شدند.
از بین 20 نمونه مدفوع، در 18 نمونه جواب PCR (90%) مثبت گزارش شد. جواب های مثبت به کمک آنزیم محدودالاثر AVAII تایید شدند و نتایج سکانس در سایت NBCI بررسی شد و مشخص شد نمونه جدا شده آرکی Methanobrevibacter smithii است.
این مطالعه نشان می دهد با توجه به تنوع میکرورارگانیسم ها در دستگاه گوارش، تعیین ژن اختصاصی و عدم داشتن همولوژی با سایر میکروارگانیسم ها در جداسازی آرکی بسیار حایز اهمیت است.