انتقال ژن fld سیانوباکتریایی به گیاه برنج به روش اگرو باکتریوم

تنش های غیرزنده مانند خشکی، شوری، دمای بالا، سمیت شیمیایی و تنش اکسیداتیو تهدیدات جدی برای کشاورزی محسوب شده و اثرات نامطلوبی بر رشد و باروری گیاهان بر جا می گذارند. در این تحقیق به منظور انتقال ژن fld سیانوباکتریایی به گیاه برنج به روش اگروباکتریوم از سویه EHA105 و حامل پلاسمید p6-ubi استفاده شد. این ناقل حاوی ژن نشانگر باکتریایی مقاومت به استروپتومایسین، نشانگر گیاهی مقاومت به هیگرومایسین و ژن فلاودکسین (fld) است. فلاودکسین نقشی مشابه فرودکسین (fd) در گیاه ایفا کرده و هنگام وقوع تنش های غیر زیستی با جلوگیری از وقوع اغتشاشات و بی نظمی های موجود در چرخه انتقال الکترون و ایجاد فرم های فعال اکسیژن به صورت آنتی اکسیدان عمل کرده و تحمل گیاه را افزایش می دهد. در این تحقیق کالوس های جنین زای برنج رقم هاشمی که بافت هدف به شمارمی روند، در انتقال ژن مورد استفاده قرار گرفت. پس از انجام مراحل تراریختی، کالوس های تراریخت احتمالی به محیط باززایی حاوی 2/0 میلی گرم بر لیتر اسید نفتالین استیک، 2 میلی گرم بر لیتر کاینتین و 50 میلی گرم بر لیتر هیگرومایسین منتقل شدند. برای ریشه زایی نیز از محیط ریشه زایی حاوی 2/0 میلی گرم بر لیتر اسید نفتالین استیک استفاده شد. گیاهان باززایی شده به لوله های حاوی محلول یوشیدا منتقل شدند. آنالیز واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) برای گیاهان تراریخت احتمالی با استفاده از پرایمرهای fld نشان داد که این گیاهان حداقل یک نسخه از ژن را دارا هستند. آنالیز PCR برای ژن virG نشان داد که تعدادی از گیاهان تراریخت، فاقد آلودگی اگروباکتریومی هستند. در حال حاضر گیاهان تراریخت حاصل در گلخانه برای تولید بذر نگهداری می شوند.