طراحی و کلون کردن microRNA-148b در شاتل وکتور لنتی ویروسی

ریزRNAها (miRNAs)، RNAهای غیر کد کننده ی کوچکی هستند که بیان ژن را از طریق اتصال به mRNA هدف تنظیم می نمایند. از آن جایی که این مولکول ها در تکثیر و تمایز سلولی نقش مهمی دارند، می توان از آن ها در پزشکی ترمیمی استفاده کرد. از میان حاملین مختلفی که برای رها سازی این الیگونوکلئوتیدها وجود دارد، سیستم لنتی ویروسی حامل مناسبی به نظر می رسد. از طرف دیگر، مشخص شده است که miR-148b در استئوژنز نقش دارد. بدین منظور، در مطالعه حاضر طراحی و کلون کردن microRNA-148b در شاتل وکتور لنتی ویروسی مورد بررسی قرار گرفت.
ابتدا پرایمرهای رشته های p3 و p5 microRNA-148b طراحی گردید و پس از هیبریداسیون، داخل پلاسمید شاتل لنتی ویروسی کلون شد. سپس ورود صحیح قطعه ها با استفاده از هضم آنزیمی و توالی یابی مورد بررسی قرار گرفت. در ادامه، پس از تولید ذرات لنتی ویروسی مربوط، از آن ها برای ترانس داکشن سلول های بنیادی مزانشیمی استفاده گردید.
miR-148b-3p/-5p طراحی شده با موفقیت داخل شاتل لنتی ویروسی کلون گردید. یافته های حاصل از هضم آنزیمی و توالی یابی، موید ورود موفقیت آمیز رشته های مورد نظر داخل پلاسمید لنتی ویروسی بود. بیان بالای Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) نشان دهنده ی کارایی بالای ترانس فکشن و ترانس داکشن بود.
در مطالعه ی حاضر دو نوع ویروس حامل miR-148b-3p و miR-148b-5p تولید گردید که می توانند جهت بررسی فرایند استئوژنز مورد بررسی قرار گیرند.