همسانه سازی و انتقال ژن AtCDPK5 به توتون

تنش های محیطی مهم ترین عامل کاهش عملکرد محصولات زراعی هستند. ژن AtCDPK5 یکی از ژن های خانواده بزرگ CDPK در گیاهان است که نقش مهمی در پاسخهای دفاعی گیاه نسبت به تنش های غیر زیستی دارد. هدف از این پژوهش همسانه سازی ژن AtCDPK5و انتقال آن به توتون به منظور افزایش تحمل به تنش های غیر زیستی بود. بدین منظور ابتدا RNA از برگ گیاه آرابیدوپسیس استخراج و cDNA ساخته شد. ژن AtCDPK5 توسط انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز با آغازگرهای اختصاصی تکثیر و به ناقل pGEM-T وارد و در باکتری E.coli کلون شد. سپس قطعه ژن مورد نظر درون ناقل pBI121 قرار داده شده و در باکتری E.coliکلون شد. یکپارچگی سازه حاوی ژن AtCDPK5 توسط انجام کلونی PCR تایید شد و توالی یابی قطعه، وجود ژن را اثبات کرد. پلاسمید نوترکیب حاصل از طریق تکنیک اگرواینفکشن به گیاه توتون منتقل شد. پس از هم کشتی با اگروباکتریوم، رشد ریزنمونه های گیاه توتون در محیط انتخابی حاوی غلظت های مختلف کانامایسین و سفوتاکسیم تراریختی آن ها را تایید کرد. گیاهچه های تراریخت به محیط ریشه زایی و سپس به گلدان منتقل شدند. واکنش زنجیره ای پلیمراز با آغازگرهای اختصاصی تراریخت بودن گیاهان توتون را در سطح DNA وcDNA تایید کرد.