غربالگری مولکولی سراشیا مارسیسنس تولید کننده پروتئاز خارج سلولی از محیط های مختلف غرب مازندران

پروتیازها یکی از مهم ترین آنزیم های کاربردی در بیوتکنولوژی و صنایع مختلف مانند صنایع چرم، صنایع غذایی، داروسازی، شوینده ها و غیره می باشند. میکروب ها به دلیل رشد سریع، سهولت کشت، دستکاری ژنتیکی در جهت تولید بهینه آنزیم، از منابع عمده تولید پروتیازها به شمار می روند. این مطالعه با هدف جداسازی سویه های سراشیا مارسیسنس از منابع طبیعی غرب مازندران و ارزیابی قابلیت تولید آنزیم پروتیاز انجام شده است.
 

این پژوهش به صورت مقطعی بر روی150 نمونه جمع آوری شده از عمق 0 تا 10 سانتی متری خاک ها و آب های مناطق غرب مازندران انجام شد. به منظور جداسازی و شناسایی اولیه میکروارگانیسم های دارای فعالیت پروتیولیتیک از محیط کشت Skim milk agar و آزمون های یوشیمیایی استفاده شد. پس از استخراج DNA و با استفاده از پرایمر اختصاصی ژن 16S rDNA گونه سراشیا مارسیسنس شناسایی گردید. سپس بهینه سازی دمایی و زمانی بر روی سویه های برتر مولد آنزیم انجام شد. همچنین وزن مولکولی تقریبی آنزیم به وسیله رسوب دهی پروتئین و روش SDS-PAGE تعیین گردید.

در مجموع از 2 سویه سراشیا مارسیسنس جداسازی شده در این مطالعه، نمونه N به عنوان سویه جدید با نام سراشیا مارسیسنس سویه 424 در بانک جهانی ژن با شماره KC790390 به ثبت رسید. این دو سویه بیشترین مقدار تولید آنزیم را در دمای 37 درجه سانتی گراد و در مدت 24 ساعت نشان دادند. بیشترین تولید آنزیم مربوط به سراشیا مارسیسنس سویه 424 با فعالیت معادلU/ml   199/80و وزن مولکولی 52 کیلو دالتون بود.

نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان دهنده پتانسیل بالای سراشیا مارسیسنس سویه 424 در تولید پروتیاز و سراشیوپپتیداز می باشد. بنابراین ارزیابی پتانسیل کاربردی این آنزیم ها در صنایع مختلف پیشنهاد می شود.