طراحی و تهیه وکتور یوکاریوتی حامل ساختار فیوژن پلی اپی توپی L1-E7 ویروسهای پاپیلومای انسانی پر خطر

آلودگی به HPV به عنوان اصلی ترین دلیل سرطان دهانه رحم شناخته می شود. این سرطان در دنیا، چهارمین سرطان شایع در میان زنان است. طراحی DNA واکسنی که علاوه بر پیشگیری، ویژگی های درمانی نیز داشته باشد می تواند در کاهش ابتلا و مرگ و میر تاثیر چشمگیری داشته باشد.

توالی ژنی شامل اپی توپ های ایمونوژنیک و حفاظت شده پروتئین های L1 و E7 ویروس های پاپیلومای انسانی پر خطر طراحی گردید. پس از سنتز ساختار فیوژن L1-E7 در وکتور کلونینگ pUC57، ساب کلون کردن آن در وکتور یوکاریوتی pcDNA3.1(-) انجام شد. غلظت و خلوص پلاسمید نوترکیب pcDNA-L1E7 توسط اسپکتروفتومتری نانودراپ تعیین شد.   

توالی ژنی موردنظر پس از برش از pUC57-L1E7 توسط آنزیم های محدود الاثر BamHI/HindIII، در جایگاه مشابه وکتور pcDNA3.1(-) ساب کلون شد. تایید حضور ژن در وکتور توسط هضم آنزیمی با BamHI/HindIII، قطعه 639 جفت بازی مربوط به ژن را روی ژل آگارز 1 درصد نشان داد. پلاسمید نوترکیب pcDNA-L1E7 توسط کیت استخراج فاقد اندوتوکسین به منظور جداسازی لیپوپلی ساکارید باکتری تخلیص شد. غلظت DNA تخلیص شده، حدود 1474 نانوگرم/ میکرولیتر به دست آمد.

کلونینگ ساختار فیوژن L1-E7 در وکتور یوکاریوتی با موفقیت انجام گرفت. در مراحل بعدی از وکتور نوترکیب برای تحقیقات درون تنی واکسن ژنی استفاده خواهد شد.