طراحی و تهیه لام تشخیصی آنتی بادی های ضد سیتوپلاسم نوتروفیل (ANCA) با روش ایمونوفلورسانس غیرمستقیم

آزمایش آنتی بادی ها علیه سیتوپلاسم نوتروفیل ها (ANCA)  اولین درخواست در تشخیص اولیه و غربال بیماران مشکوک به بیماری های خودایمن واسکولیت عروق کوچک و همچنین پیگیری روند درمان بیماران است که با استفاده از روش ایمونوفلورسانس غیرمستقیم (IFA) حضور آنتی بادی ها علیه آنتی ژن ها درون سیتوپلاسم نوتروفیل ها را بررسی می شود. هدف از این مطالعه طراحی و تهیه لام های تشخیص آنتی بادی ها علیه سیتوپلاسم نوتروفیل ها (ANCA) به روش ایمونوفلورسانس غیرمستقیم است.

 با استفاده از روش گرادیانت شیب غلظت و محلول دکستران، نوتروفیل ها از خون محیطی افراد سالم جدا شدند. خلوص و بازده سلول های استخراج شده توسط رنگ آمیزی رایت گیمسا، لام نیوبار و دستگاه شمارش گر اتوماتیک بررسی شد. با استفاده از فیکساتور اتانول، نوتروفیل های جدا شده بروی اسلاید فیکس و رنگ آمیزی فلورسانت شدند.

خلوص و تعداد نوتروفیل های جدا شده توسط دستگاه شمارشگر سلولی بررسی شد. بسته به نوتروفیل ورودی بطور میانگین (±انحراف استاندارد) تعداد نوتروفیل های جدا شده برابر با 950± 6000 سلول در هر میکرولیتر بود. میانگین خلوص نوتروفیل های جدا شده برابر با 1/94 درصد بود. همچنین توسط رنگ آمیزی تریپان بلو درصد سلول های زنده بیش از 85 درصد قبل از فیکساسیون تعیین گردید. آنالیز نتایج رنگ آمیزی فلورسانس غیر مستقیم ANCA بر روی لام های تهیه شده در مقایسه با برند تجاری مرجع کاملا منطبق بود.

نتایج این مطالعه نشان می دهد که روش بکار برده شده می تواند برای تجاری سازی و تولید لام های ANCA جهت اهداف تشخیصی بکار گرفته شود. در این زمینه علاوه بر بهینه نمودن مراحل جداسازی و فیکس نمودن سلول ها نیاز است جهت تولید در تعداد انبوه و تجاری، پایداری لام های تهیه شده در زمان انبارش و نگهداری نیز ارزیابی قرار گرفته و بهینه شود.