اثر داروی والپروئیک اسید بر بیان ژن های SOCS1, SOCS3, JAK1, JAK2, STAT3, STAT5A و STAT5B در سرطان کبد رده سلولی HepG2

فعال شدن نابجای مسیرهای گوناگون داخل سلولی در تمایز، رشد، آپوپتوز و بقاء سلولی دخیل است. این مسیرها در القاء و پیشبرد سرطان دخیل هستند. مسیرهای داخل سلولی شناخته شده مختلف از قبیل JAK/STAT با عث تومورزایی و ایجاد سرطان می شوند. این مسیر، یک نقش مهم در عملکردهای مختلف سلولی بازی می کند. این مسیر می تواند بوسیله سیتوکین ها فعال شود. ژن های سرکوب کننده مسیر سیتوکین (Suppressors of cytokine signaling, SOCSs)، یک نقش محوری در تنظیم سیستم ایمنی بازی می کنند. مطالعات اخیر نشان داده است که داستیلاسیون ژن های SOCS (بعوان ژن های سرکوب کننده سرطان) باعث خاموش شدن ژن و القاء سرطان های مختلف از قبیل سرطان کبد می شود.  ترکیبات مهارکننده آنزیم های هیستون داستیلاز برعلیه آنزیم های مزبور عمل می کنند. پیشتر، ما تاثیر داروی تریکو استاتین آ و والپروییک اسید (بعنوان داروهای مهار کننده آنزیم هیستون داستیلاز) را بر روی سرطان کولون  و کبد گزارش کردیم. مضافا اینکه ما گزارش کردیم داروی والپروییک اسید باعث افزایش بیان ژن های SOCS1 و SOCS3 در سرطان کولون می شود. هدف تحقیق حاضر بررسی اثر داروی والپروییک اسید بر روی مسیر JAK/STAT شامل ژن های SOCS1, SOCS3, JAK1, JAK2, STAT3, STAT5A و STAT5B ، مهار رشد سلولی و القاء آپوپتوز در سلول های سرطانی کبد رده HepG2 بود.

سلول های سرطانی کبد رده HepG2 از انستسیتو پاستور خریداری شدند. ابتدا سلول های سرطانی کبد رده HepG2 کشت داده شدند و پس از اینکه همپوشانی سلول ها به حدود 80 درصد رسید با استفاده از تریپسین سلول ها جمع آوری و پس از شستشو، در پلیت های 96 خانه کشت داده شدند. پس از گذشت مدت زمان 24 ساعت از کشت سلول ها، محیط کشت تخلیه و محیط حاوی داروی والپروییک اسید با غلظت های مختلف (0، 1، 5، 7.5، 10، 15، 20 و 25 میکرومول) جایگزین شد (گروه کنترل فقط حلال دارو یعنی DMSO دریافت کردند). پس از گذشت مدت زمان 24 و 48 ساعت، سلول ها با محلول PBS شستشو داده شدند. برای تعین میزان زنده بودن سلول، از تکنیک MTT استفاده شد. برای تعین میزان سلول های آپوپتوتیک و بیان ژن سلول ها با داروی والپروییک اسید با غلظت 643/6 میکرومول برای مدت 24 ساعت و 401/5 میکرومول برای مدت 48 ساعت تریت شدند و پس از 24 و 48 ساعت به ترتیب از تکنیک های فلوسیتومتری و ریل تایم برای تعین سلول های آپوپتوتیک وبیان ژن های SOCS1, SOCS3, JAK1, JAK2, STAT3, STAT5A و  STAT5B استفاده شد. اطلاعات بدست آمده با استفاده از نرم افزار گراف پد پریسم 8 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

داروی والپروییک اسید بطور معنی داری باعث افزایش بیان ژن های SOCS1 و SOCS3، کاهش بیان ژن های JAK1, JAK2, STAT3, STAT5A  و STAT5B  ، مهار رشد سلولی شد. این ترکیب بطور معنی داری باعث ایجاد آپوپتوزگردید (P < 0.001). درصد سلول های آپوپتوتیک پس از 24  و 48 ساعت به ترتیب 38/22 و 3/50 بود. حد اکثر میزان آپوپتوز پس از 48 ساعت مشاهده گردید.

داروی والپروییک اسید می تواند از طریق مسیر JAK/STAT باعث القاء آپوپتوز در سرطان کبد رده HepG2 شود.