خالص سازی پروتئین مهار کننده تریپسین نوع کونیتز از دانه سویا با کروماتوگرافی میل ترکیبی

پروتئین مهارکننده تریپسین موجود در سویا با داشتن 181 اسید آمینه و دو باند دی سولفیدی تمایل خاصی به آنزیم تریپسین پانکراس دارد. این پروتئین که به میزان قابل توجهی در سویا وجود دارد، مقاومت بالایی در برابر حرارت و مواد شیمیایی از خود نشان می دهد. روش های متعددی مانند ترکیبی از روش های کروماتوگرافی، کروماتوگرافی جذبی با استفاده از فلزات و استفاده از الکتروفورز برای جداسازی این پروتئین مورد استفاده قرار گرفته است.

در این مطالعه ابتدا پودر سویا با متانول چربی زدایی شد و بخش باقیمانده در آب دیونیزه عصاره گیری گردید. با روش رسوب در نقطه ایزوالکتریک پروتئین های ذخیره ای محلول حذف گردید. بخش غنی از مهارکننده تریپسین به ستون جذبی وارد شده و پس از شستشوی ستون و خارج نمودن پروتئین های متصل نشده، مهار کننده ترپیسین از ذرات ژل با کاهش دادن pH جدا و از نظر فعالیت و خلوص مورد بررسی قرار گرفت.

بررسی پروتئین بدست آمده در SDS-PAGE خلوص بالای 99 درصد و وزن مولکولی 20KDa را نشان داد. مهارکننده تریپسین در SDS-PAGE در شرایط احیایی و غیر احیایی به صورت یک باند مشابه دیده شد که نشان دهنده تک زنجیره ای بودن این پروتئین است. اشباع نمودن ستون، افزایش ظرفیت تام ستون و انجام کروماتوگرافی در pH=6-8 بازدهی و خلوص پروتئین بدست آمده را افزایش داد.

به وسیله این روش می توان در مدت زمان کم مقادیر قابل توجهی از مهارکننده تریپسین را با خلوص بسیار بالا جداسازی نمود. از ویژگی های دیگر این روش سادگی، عدم نیاز به دیالیز و یا بافر می باشد.