شناسائی توالی ژنومی ویروس آنفلوانزای اسب با استفاده از یک روش nested-PCR جدید

شناسایی سریع آنفلوانزای اسب برای کنترل این بیماری ضروری است. در چند سال گذشته تلاش برای جداسازی ویروس آنفلوانزای اسب با موفقیت محدودی همراه بوده است. بعلاوه، در حیوانات واکسینه شده ممکن است تا پنج پاساژ برای جداسازی ویروس مورد نیاز باشد. به منظور استفاده از یک روش سریع، قابل اعتماد و حساس برای شناسایی ویروس آنفلوانزای اسب به عنوان جایگزین جداسازی ویروس، یک روش nested PCR (nPCR) بهینه سازی گردید. این آزمایش nPCR بدون توجه به تیپ و تحت تیپ می تواند ژنوم ویروس آنفلوانزای اسب را شناسایی نماید. در ابتدا، تحت تیپ-1 ویروس آنفلوانزای اسب آزمایش شد و با استفاده از پرایمرهایی که پیشتر گزارش شده بود قطعه ای به طول bp244 از ناحیه conserve ژن ماتریکس ویروس آنفلوانزا تکثیر شد. در قدم بعدی برای افزایش حساسیت آزمایش اول، یک جفت پرایمر داخلی جدید طراحی شد. یک قطعه bp150 در آزمایش nPCR بدست آمد. ویژگی نتایج بوسیله تعیین توالی محصول PCR مورد تائید قرار گرفت. حساسیت این آزمایش ها برای RT-PCR و nPCR به ترتیب تا حد تشخیص 55/10 و 275/5 نانوگرم از RNA ویروس در نمونه تعیین گردید. این روش سریع تشخیص مولکولی که بسیار حساس نیز هست، ویروس آنفلوانزا را در مدت کوتاهی شناسائی می نماید. بنابراین می تواند در تشخیص زودهنگام همه گیری های مشکوک به آنفلوانزای اسب ارزشمند باشد. یک مزیت اضافی این روش ارزش آن در شناسایی ویروس آنفلوانزای تیپ A در دیگر گونه های حیوانی می باشد.