مهار بیان ژن نوکئوستمین در رده سلولی سرطانی مثانه با واسطه استراتژی RNAi

نوکلئوستمین جزء خانواده ای از پروتئین های هستکی است که به میزان زیادی در سلول های بنیادین جنینی، عصبی و مزانشیمی بیان می شود و در تنظیم خودبازسازی این سلول ها نقش دارد. بیش بیان این ژن در رده های سلولی سرطانی متعدد و نیز بافت های توموری چون تومورهای معده، کبد و پروستات نشان داده شده است. هدف از مطالعه حاضر، بررسی آثار سرکوب بیان این ژن در رده سلولی سرطانی مثانه با روش RNAi است. پس از تایید بیان ژن نوکلئوستمین در رده سلولی سرطانی 5637، الیگونوکلئوتیدهای 21 تایی بر علیه آن به داخل سلول ترانسفکت شده و سرکوب بیان ژن با روش RT-PCR، ایمونوسیتوشیمی و وسترن بلات تایید شد. آنالیز رشد سلولی با شمارش سلول ها انجام گرفت. تغییرات در چرخه سلولی و رخداد مرگ برنامه ریزی شده سلول به ترتیب با رنگ آمیزی سلول ها با رنگ پروپیودیم آیودید وآنکسین V-FITC مورد بررسی قرار گرفت. ژن نوکلئوستمین به میزان بالایی در سلول های 5637 بیان می شود. بررسی بیان ژن نوکلئوستمین با روش نیمه کمی و پس از تیمار با الیگونوکلئوتیدهای اختصاصی بر علیه این ژن، کاهشی در حدود 85 درصد را در مقایسه با گروه های کنترل نشان داد. علاوه بر این، نتایج ایمونوسیتوشیمی و وسترن بلات نیز تاییدکننده سرکوب بیان ژن در حد پروتئین بود. بررسی منحنی رشد سلول ها نشان داد که با گذشت 72 ساعت، کاهش قابل ملاحظه ای در تعداد سلول های گروه تیمار شده با الیگونوکلئوتیدهای نوکلئوستمین قابل مشاهده است. بررسی چرخه سلولی نیز بیانگر رخداد مرگ برنامه ریزی شده سلول پس از مهار نوکلئوستمین بود که رنگ آمیزی اختصاصی با آنکسین V-FITC نیز این یافته را تایید نمود. بیان ژن نوکلئوستمین نقش مهمی در تکثیر سلولی و جلوگیری از مرگ برنامه ریزی شده سلول در سلول های رده سرطانی 5637 ایفا می کند. مطالعات بیشتر در زمینه سرکوب بیان این ژن در محیط بدن می تواند در آینده راهگشای یافتن هدف های درمانی بالقوه برای سرطان مثانه شود.