جداسازی و تخلیص آلفا 1- مهارکننده پروتئیناز از منبع انسانی و تعیین برخی خصوصیات فیزیکوشیمیایی آن

مطالعه حاضر روش تخلیص آلفا-1 مهار کننده پروتئیناز Alpa-1- Proteinase PI1Inhibitor= A از منبع غنی شده خمیر 1-IV کوهن را با حذف مراحل پیچیده و مواد شیمیایی گران قیمت در شرایط ساده و مقرون به صرفه و سریع توضیح می دهد.
ابتدا PI1A با دو مرحله رسوبگیری به وسیله پلی اتیلن گلیکول از سایر پروتئین های موجود در منبع اولیه (خمیر IV-1 استخراج و سپس با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یون روی ژل DEAE- سفاروز B6CL پروتئین با درجه خلوص بالاتر جداسازی و تخلیص شد. ویروس زایی محصول به روش پاستوریزاسیون (انکوباسیون C60 و 10 ساعت) بدون تغییر فاحش در فعالیت بیولوژیکی پروتئین آن انجام شد. محصول نهایی به وسیله روش اولترافیلتراسیون تغلیظ و سپس به صورت لیوفیلیزه نگهداری شد. برای تعیین فعالیت پروتئین از ظرفیت مهاری تریپسین (TIC) استفاده شد. میزان PI1A محصول با روش ایمونودیفیوژن شعاعی (SRID) تعیین شد.
در این فرایند راندمان 60% و درجه خلوص PI1A ایزوله شده 62/0 و وزن ملکولی آن با استفاده از روش SDS-PAGE در حدود D540000 تخیمن زده شد. همچنین برای مشاهده دقیق تر درجه خلوص و تایید خاصیت آنتی ژنیک (ایمونوراکتیویته) از روش ایمونوالکتروفورز در مقابل آنتی بادی تام انسانی و آنتی بادی اختصاصی بر علیه PI1A استفاده شد.
نتایج فوق بیانگر تخلیص PI1A با درجه خلوص 62% می باشد، همچنین بررسی PI1A و تریپسین حاکی از آن بود که g2-5/1 از این پروتئین توانایی مهار g1 تریپسین را داشت بنابراین هم درجه خلوص و هم خاصیت مهارکنندگی PI1A تخلیص شده با نوع تجاری قابل مقایسه است.