شناسایی دقیق حذف های ناشناخته خوشه ژنی بتاگلوبین در ناقلین بتا تالاسمی با استفاده از دو روش Real-time PCR و MLPA

بتا تالاسمی به طور عمده از جهش های نقطه ای یا حذف های کوچک ناشی می شود ولی مواردی از وجود حذف های بزرگ در خوشه ژنی بتاگلوبین مشاهده شده است. شناسایی حذف های شناخته شده مبتنی بر روش Gap PCR می باشد در حالی که حذف های ناشناخته با این روش شناسایی نمی شوند. برای فایق آمدن بر این محدودیت، دو روش کمی Real-time PCR و MLPA برای بررسی کمی خوشه ژنی بتاگلوبین به کار گرفته شد.
در این مطالعه که به صورت مورد - شاهدی انجام شد، به روش سرشماری 40 فرد ناقل مشکوک به حذف در خوشه ژنی بتاگلوبین که دارای شاخص های خونی کاهش یافته(pg 27 MCH <، fl 80 < MCV)، هموگلوبین A2 نرمال و هموگلوبین F افزایش یافته یا نرمال بودند وارد مطالعه شدند. تعداد نسخه های ژنی با به کارگیری روش Real-time PCR و روش مقایسه ای چرخه آستانه، مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین تعداد نسخه های ژنی با روش MLPA نیز ارزیابی شد.
نتایج حاصل از Real-time PCR برای ژن های HBB، HBD و HBG2 با استفاده از روش بررسی مقایسه ای چرخه آستانه، میزان – ΔΔ Ct 2 را برای افراد سالم، 18/0 ± 96/0 و برای ناقلین حذف در خوشه ژنی بتاگلوبین، 04/0 ± 58/0 نشان داد. هم چنین نتایج حاصل از MLPA، کاهش حدود 50% در ارتفاع پیک شناساگرهای تکثیر یافته مرتبط با ژن حذف شده در افراد هتروزیگوت را نشان داد.
نتایج MLPA و بررسی پیک های حاصل از تکثیر شناساگر، وجود حذف را در مناطقی که توسط Real-time PCR شناسایی شده بود، تایید کرد. با کمک این دو روش می توان حذف های شناخته شده و ناشناخته را در ناقلین بتا تالاسمی با دقت زیاد شناسایی نمود.