روش انتقال ژن به گیاه ترشک (Rumex acetosa L)

در این مطالعه عوامل موثر بر انتقال ژن به گیاه ترشک مورد بررسی قرار گرفت. از اگرو باکتریوم، سویه LBA4404 حاوی پلاسمید pBI121، وغلظتهای مختلف کانامایسین و زمان های مختلف تلقیح با استفاده از ریز نمونه برگ برای ارزیابی انتقال ژن گزارشگر gus استفاده گردید. کشت قطعات برگ روی محیط کشت MS دارای 5/1 میلی گرم در لیترBAP و 75/0 میلی گرم در لیترIAA و غلظت های کانامایسین صفر، 10، 25، 50، 75 و 100 میلی گرم در لیتر نشان داد که غلظت 25 میلی گرم در لیتر کانامایسین و بالاتر از آن از تولید کالوس و باززایی گیاه جلوگیری نموده و به عنوان غلظت آستانه کانامایسین در محیط کشت گزینش تعیین گردید. اثر غلظت های مختلف آگروباکتریوم (1، 6/0 و 2/0 OD-=) با زمان های مختلف تلقیح (2، 8 و 25 دقیقه) مورد ارزیابی قرار گرفت. برای این منظور ریز نمونه های برگ با سوسپانسیون اگروباکتریوم دارای پلاسمید pBI121 واجد ژن gus تلقیح شدند. ریزنمونه ها بعد از همکشتی به محیط باززایی حاوی 500 میلی گرم در لیتر کربنی سیلین 200 میلی گرم در لیتر سفاتوکسیم و 25 میلی گرم در لیتر کانامایسین منتقل شدند. آزمون GUS سنجی بیان موفق این ژن را در گیاهان باززایی شده در شرایط تلقیح 2/0 و 6/0 OD= و مدت زمان 2 دقیقه تلقیح نشان داد.