روشی ساده برای جداسازی سلول های بنیادی (نئوپلاست ها) از کرم های پهن پلاناریا

روش ساده و پربازده برای استخراج سلول های بنیادی (نئوبلاست های) از کرم های پهن پلاناریا حدود 12-10 کرم پلاناریا از جنس Dugesia و با اندازه متوسط 18 میلی متر به هموژنیزر دستی حاوی 1 میلی لیتر محلول نمکی پلانارین ها منتقل و بعد از خرد شدن، به ترتیب از فیلترهای نایلونی 60، 41، 30، 20 و 11 میکرومتری عبور داده شدند. برای پی بردن به میزان خلوص نئوبلاست ها، سوسپانسیون نهایی حاصل کرم های سالم و کرم های فاقد نئوبلاست - که نئوبلاست های آنها با تاباندن 30 گری (Gy) پرتو X نابود شده بودند - مقایسه شدند. برای مشخص شدن سلول ها از سایر ذرات از رنگ هوخست و برای مشخص شدن سلول های مرده از رنگ پروپودیوم یدید و متیلن بلو استفاده شد.
از هر 12-10 کرم حدود 3-6/2 میلیون سلول حاصل شد. نتایج فلوسیتومتری نشان داد که حدود 83 درصد از ذرات استخراج شده سلول هستند و تیمار با پرتو X حدود 50 درصد از این ذرات را ازبین برده است. 18-16درصد سلول های استخراج شده مرده و 66-62 درصد از سلول های استخراج شده سلول های حساس به اشعه یا همان نئوبلاست ها بودند. لیز کردن سلول ها با آب دوبار تقطیراستریل و بررسی محلول نهایی با میکروسکوپ اختلاف فاز نشان داد که بخش عمده ای از ذرات غیرسلولی موجود در سوسپانسیون نهایی سلولی خارهای کیتینی استحکام بخش مزانشیم و رابدیت ها هستند.
روش ارایه شده منجر به افزایش خلوص نئوبلاست ها تا حدود 66 درصد می شود که روشی ارزان، سریع و پربازده برای استخراج نئوبلاست ها جهت استفاده در مطالعات پروتئوم و ترانس کریپتوم یا سایر روش های نیازمند حجم بالای سلول است.