جداسازی لپتوسپیراهای بیماری زا از خون بیماران و تشخیص و تایپینگ آنها به روش PCR-RFLP

لپتوسپیروز یک بیماری مشترک انسان - حیوان شایع در سراسر جهان به ویژه در مناطق گرمسیری و نیمه گرمسیری از جمله در ناحیه جلگه ای استان گیلان است که توسط گونه های بیماری زای لپتوسپیراها به وجود می آید. تعیین هویت لپتوسپیراها با سروتایپینگ توسط روش MAT پرهزینه، وقت گیر و پیچیده است و روش های ملکولی می توانند؛ جایگزین شوند. این مطالعه به منظور جداسازی لپتوسپیراهای بیماری زا از خون بیماران و تشخیص و تایپینگ آنها به روش PCR-RFLP در استان گیلان انجام شد.

در این مطالعه توصیفی، بیماران بستری شده در بخش های اورژانس، داخلی و عفونی بیمارستان رازی رشت که تشخیص بالینی لپتوسپیروز داشتند؛ از ابتدای اردیبهشت تا پایان مرداد 1387 بررسی شدند. کشت های مثبت با روش فنل-کلروفرم مورد استخراج DNA قرار گرفتند. PCR با استفاده از دو جفت پرایمر G1 و G2 و B64-I و B64-II انجام شد. محصول PCR حاصل از پرایمرهای G1 و G2 با آنزیم DdeI و محصول PCR حاصل از پرایمرهای B64-Iو I I B64- با آنزیم I hinf برش داده شدند و الکتروفورز گردیدند و الگوی باندی آنها با الگوهای مربوط به سویه های استاندارد مقایسه وتعیین هویت شد.

65 مورد از مجموع 107 نمونه کشت داده شده؛ مثبت گردیدند. 56 نمونه با پرایمرهای G1 و G2 جواب دادند که به گونه های اینتروگانس و بورگ پترسنی متعلق بودند و 9 مورد نیز با پرایمرهای B64-I و I B64-Iپاسخ دادند که همگی به گونه کیرشنری متعلق بودند.

این مطالعه نشان داد که اکثریت لپتوسپیراها در این منطقه از گونه های اینتروگانس و بورگ پترسنی می باشند. با توجه به مشکلات متعدد در سروتایپینگ لپتوسپیراها، روش PCR-RFLP برای تعیین هویت و مطالعه ساختارهای یک جمعیت داخل گونه ای مفید می باشد و استفاده مستقیم از آن برای نمونه های بالینی و تشخیص سریع و تعیین هویت، کاربرد دارد.