شناسایی موتاسیونهای مرتبط با مقاومت به ایزونیازید در مایکوباکتریوم توبرکلو زیس بیماران مسلول با استفاده از روش MAS PCR و PCR-RFLP

ایزونیازید یکی از داروهای مهم خط اول درمان سل می باشد. مقاومت به این دارو در بسیاری از نقاط جهان رو به افزایش است. جهش های ایجاد شده در ژنKatG و inhA در اغلب موارد عامل مقاومت به ایزونیازید می باشند. هدف از این مطالعه ارائه روشی مناسب و سریع برای شناسایی موتاسیونهای مرتبط با مقاومت به ایزونیازید در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس می باشد. در این مطالعه وجود جهش در نواحی خاصی از ژنهای katG وinhA در90 نمونه کشت مثبت بیماران مسلول ریوی پس از انجام تست های حساسیت داروئی بررسی شد. برای تعیین جهش های کدون 315 KatG از تکنیکPCR-RFLP استفاده گردید. محصول PCR حاصل از تکثیر این قطعه ژنی (bp620) توسط آنزیم محدودالاثر MspI برش داده شد. برای شناسائی جهش در ژن inhA نیز از تکنیک MAS-PCR استفاده شد.
5/34% درصد از نمونه های مقاوم به ایزونیازید فنوتیپ Thr315 و 5/65% از نمونه های مقاوم فنوتیپ Ser315 را نشان دادند. اختصاصیت Thr315 برای نمونه های مقاوم 100% می باشد. همچنین در این مطالعه از 52 نمونه مقاوم به ایزونیازید 6/34% در کدون 463 دارای اسیدآمینه Arg و 4/65% دارای اسیدآمینه Leu بودند. فراوانی جهش در لوکوس (15C →T-)inhA نمونه های MDR و غیرMDR به ترتیب 20% و 7/16% درصد بود.
با استفاده از روش PCR-RFLP (آنزیم MSPI) و MAS PCR جهش های ایجاد شده در کدون 315 ژن KatG و ناحیه پروموتورinhA شناسایی می شوند. این روش ها علاوه بر سادگی و ارزان بودن نسبت به روش های دیگر در مدت زمان کمتری نتایج دقیق و مطمئنی را فراهم می آورند.