بررسی کارآیی برخی روش های سرولوژیکی و مبتنی بر PCR در تشخیص و ردیابی باکتری عامل بیماری آتشک درختان میوه دانه دار

بیماری آتشک با عامل باکتریایی Erwinia amylovora از بیماری های مهم میوه های دانه دار محسوب می شود. این بیماری طی سال های گذشته خسارت های هنگفتی به باغ های میوه دانه دار ایران تحمیل نموده است. استفاده از روش های دقیق و قابل اطمینان جهت شناسایی و ردیابی به موقع بیمارگر، به کنترل زود هنگام و جلوگیری از گسترش بیماری و حذف درختان آلوده کمک می نماید. در این تحقیق دو آنتی سرم پلی کلونال اختصاصی تهیه شده و برای ردیابی سلول های باکتری E. amylovora (Ea) در آزمون های نشت در آگار و DIBA مورد استفاده قرار گرفتند. آزمون دیبا قادر به ردیابی7 10×1 سلول باکتری در هر میلی لیتر کشت خالص و نیز عصاره آلوده بود. با غنی سازی در محیط مایع کینگ بی، سطح حساسیت دیبا به10 سلول افزایش یافت. در این بررسی کارایی روش های سرولوژیکی با برخی از روش های مبتنی بر PCRکه جهت شناسایی این باکتری منتشر شده اند نیز مقایسه گردید. به این منظور قطعه ای یک کیلو بازی از پلازمید pEA29 بنامpstI با استفاده از آغازگرهای A وB در روش PCR تکثیر گردید. سطوح حساسیت این روش در آب و عصاره گیاهی به ترتیب 104×2 و 106×2 سلول در مخلوط واکنش بود. سه روش ذکر شده قادر به شناسایی استرین های متعلق به میزبان ها و مناطق مختلف کشور بوده و جهت شناسایی Ea در مقایسه با سایر جنس های باکتریایی اختصاصی عمل نمودند. در Nested-PCR با استفاده از آغازگرهای AJ75 و AJ76 یک قطعه 800 جفت بازی تکثیر گردید. این روش بسیار حساس توانست در مخلوط واکنش تا یک سلول باکتریایی را در آب و تا 100 سلول را در عصاره گیاهی ردیابی نماید.