ساخت کاست pcDNA/fimH به عنوان کاندید واکسن ژنی علیه عفونت ادراری و بررسی بیان آن در رده سلولی COS7

مهم ترین عامل عفونت ادراری اشریشیا کلی یوروپاتوژن دارای پیلی تیپ یک است. اشریشیا کلی یوروپاتوژن پس از تهاجم به سلول های اپی تلیال مثانه، به صورت داخل سلولی تکثیر می شود و حضور ایمنی سلولی در این جا مهم است. هدف از این مطالعه، ساخت یک کاست ژنی بود که بتواند سیستم ایمنی سلولی را تحریک نماید.

ابتدا ژن fimH را با PCR تکثیر شد و در وکتور یوکاریوتی pcDNA.1 کلون شد. پس از توالی یابی و تایید کلون، به منظور بررسی بیان ژن و عملکرد صحیح کاست تهیه شده در سلول یوکاریوتی، در سلول COS7 وارد شد و به منظور بیان ژن با روش RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت. بیان ژن در سطح mRNA با میکروسکوپ فلورسانس بررسی شد.

ژن fimH با روش PCR به خوبی تکثیر شد. محصول PCR در وکتور pcDNA.1 قرار گرفت و کاست ژنی pcDNA/fimH ساخته شد. برای بررسی عملکرد صحیح این کاست سلول های COS7 ترنسفکت شدند و بیان ژن fimH با روش RT-PCR مورد تایید قرار گرفت.

کاست ژنی pcDNA/fimH می تواند ژن fimH را در سلول یوکاریوتی بیان کند و به عنوان یک کاست DNA ارزشمند جهت واکسیناسیون بر ضد عفونت های ادراری است.