جدا سازی ژن زیر واحد G آنزیم V-ATPase از قارچ Trichophyton rubrum و کلونینگ آن در E.coli

T.rubrum) Trichophyton rubrum) شایع ترین عامل کچلی انسان در سراسر دنیا می باشد. درمان این بیماری کامل نیست و پس از قطع دارو عود کننده است. اخیرا زیرواحد G از آنزیم V-ATPase به-عنوان هدف برای داروها مورد توجه قرار گرفته. هدف مطالعه کلون کردن ژن کدکننده زیرواحد G آنزیم V-ATPase قارچ T.rubrum در باکتری E.coli به منظور نگهداری و مطالعه بر روی پروتئین حاصل از آن بود.
DNA و RNA از قارچ درماتوفیت T.rubrum جدا شد، سپس توسط PCR و RT-PCR تکثیر یافت و محصول RT-PCR در پلاسمید T–pTG19 الحاق شد. پلاسمید نوترکیب با روش شوک حرارتی به داخل E.coli وارد شد. باکتری کشت داده شد و کلنی های مشکوک جدا شدند و مجدادا کشت داده شدند. سپس PCR طبق روش قبل انجام شد.
وزن مولکولی DNA استخراج شده حدود 750bp و cDNA تقریبا 700bp بود. با کشت E.coli بر روی (Luria agar (LB Agar کلنی های آبی و سفید دیده شد. PCR کردن DNA حاصل از کلنی های مشکوک نشان داد 5 کلون از 8 کلون دارای ژن مورد نظر بود.
به نظر می رسد که این ژن دارای اینترون است. کلنی های سفید رنگ به احتمال زیاد دارای ژن مورد نظر می باشد. نتایج حاصل از PCR در آخرین مرحله نشان دهنده کلون شدن ژن مورد نظر است.