همسانه سازی ژن LysA در وکتور بیانی در راستای افزایش تولید اسیدآمینه L- لیزین

L – لیزین یکی از اسیدهای آمینه ضروری است که در تغذیه انسان و دام اهمیت بسزایی دارد. این اسیدآمینه به دلیل کاربرد بسیار در صنایع دارویی و غذایی حائز اهمیت می باشد. تولید صنعتی لیزین از نظر اقتصادی بسیار مهم است. سالانه چندین هزار تن لیزین در جهان بوسیله Corynebacterium glutamicum تولید می شود.
پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی با دو توالی برشی برای آنزیم های NheI و HindIII، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر یافت و جهت تعیین ترادف و هضم آنزیمی مناسب در وکتور pTZ57R/T کلون گردید. پس از تعیین ترادف و اطمینان از صحت ژن مورد نظر، قطعه ژنی با انتهای چسبنده در وکتور بیانی pET28a کلون و در سویه E.coli BL21(DE3) ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب با روش های هضم آنزیمی و تعیین ترادف ارزیابی شد.
ژن LysA به طول kb 3/1 با توالی صحیح کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد بدین ترتیب که ژن LysA به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. همسانه سازی با استفاده از SDS-PAGE تایید شد.
بحث: در این مطالعه برای اولین بار بیان ژن آنزیم دی آمینوپیمیلات دکربوکسیلاز (4.1.1.20 EC) همسانه گردید و وکتور بیانی بررسی شد.