همسانه سازی و انتقال ژن فعال کننده پلاسمینوژن بافتی(tPA) با منشاء انسانی به گیاه توتون

گیاهان جهت تولید پروتئینهای نوترکیب به عنوان یک جایگزین امیدبخش سیستمهای تخمیر میکروبی و کشت سلولهای جانوری پیشنهاد شده اند، به دلیل اینکه مزایایی همچون ایمنی بالا، هزینه پایین، تغییرات پس از ترجمه و حجم بالای تولید دارند. در این تحقیق، cDNA ژن فعال کننده پلاسمینوژن بافتی(tPA) به گیاهان توتون منتقل شده است. این ژن نوترکیب تحت کنترل پیشبرنده CaMV 35S و خاتمه دهنده NOS قرار گرفت. توالی افزایش دهنده Kozak و ترادف کد کننده پپتید نشانه KDEL، به ترتیب به انتهای آمینی و کربوکسیلی ژن tPA افزوده شدند. سازه تهیه شده(pBI(tPA به روش انتقال ژن مبتنی بر اگروباکتریوم به ژنوم گیاه توتون منتقل و گیاهان تراریخته روی محیط حاوی کانامایسین انتخاب شدند. جوانه های تراریخت ریشه دار شده ابتدا به پرلیت و سپس به خاک منتقل گردیدند و بذور نسل اول (T0) از آنها جمع آوری شد. ارزیابی گیاهان تراریخت با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) و RT-PCR و وسترن بلات انجام شد.