شناسایی همزمان و مقایسه بروسلاهای بیماری زا در بین نمونه های سرمی و خون انسان به روش Multiplex PCR و تایید نتایج آن با روش PCR-RFLP

مطالعات کمی در خصوص جداسازی بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس عامل بروسلوزیس از سرم بیماران انجام است، این مطالعه با هدف جداسازی همزمان بروسلاهای بیماری زا از نمونه های سرمی انسان به روش Multiplex PCR طراحی گردید.
در این مطالعه آزمایشگاهی، 50 نمونه خون و سرم بیمار مشکوک با علائم بالینی بروسلوزیس، پس از تیترسنجی به محیط کشت بروسلا اگار تلقیح شده و برای تشخیص، از تکنیک مولکولی Multiplex-PCR با سه پرایمر استفاده شد. به منظور کشت نمونه های سرم، ml 5/0 از سرم در بروسلا براث تلقیح شده و به مدت 72 ساعت در انکوباتور 37 درجه سلسیوس و 5% گاز دی اکسید کربن، گرمخانه گذاری شد. برای تایید نتایج PCR، محصولات PCR با استفاده از آنزیم های برش دهنده TaqI و RsaI مطابق مطالعات قبلی تحت برش آنزیمی قرار گرفتند.
از میان 50 نمونه خون 4 مورد (8%) کشت مثبت بودند که هر 4 مورد (100%) پس از بررسی خصوصیات و انجام تست های بیوشیمیایی و افتراقی به عنوان بروسلا ملی تنسیس شناسایی شدند. پس از انجام Multiplex PCR، 9 مورد (18%) مثبت و 41 مورد (82%) منفی بودند. در میان موارد مثبت سرم، باند مربوط به بروسلا ملی تنسیس در 7 مورد (78%) و باند مربوط به بروسلا ابورتوس در 2 مورد (22%) مشاهده گردید. از مجموع 50 نمونه خون 5 مورد (10%) مثبت و 45 مورد (90%) منفی بودند که در تمامی آن ها (100%) باند مربوط به بروسلا ملی تنسیس مشاهده گردید. تمام نتایج با روش PCR_RFLP تایید شد.
مطالعه ما نشان داد که این روش ساده و سریع بوده و حساسیت آن برای جداسازی بروسلاها (به خصوص بروسلا ابورتوس و ملی تنسیس) از سرم در مقایسه با خون کامل، بیشتر است.