کلونینگ و بیان ژن muc1 در میزبان پروکاریوتی به منظور بکارگیری در تشخیص زود هنگام سرطان سینه

سرطان سینه دومین و شایع ترین علت مرگ در میان زنان جهان می باشد. غدد پستانی طبیعی و کارسینوماهای پستانی باید تحت کنترل عوامل نظارتی، فعال کننده ها و مهارکننده ها در داخل بافت سینه و همچنین یک سری فاکتورهای رشد، گیرنده ها و پروتئین ها در خارج از بافت سینه باشند. سطوح آنتی ژن های مرتبط با تومور می توانند به عنوان شاخص پیش بینی در درمان این بیماری استفاده شوند. از روش های نوین درمانی استفاده از آنتی بادی بر علیه آنتی ژن MUC1 است که در 90٪ سرطان های سینه دارای افزایش بیان می باشد. MUC1 سرطانی عملکرد E Cadherinرا که یک مولکول موثر در چسبندگی سلولی است، مختل می سازد. هدف از این تحقیق تولید پروتئین نوترکیبMUC-1 به منظورتشخیص زود هنگام سرطان سینه می باشد.
بخشی از ژن muc-1 با طراحی پرایمر مناسب بوسیله ی PCR تکثیر شده و سپس درون ناقل پلاسمیدی pET28a جهت بیان در سیستم پروکاریوت کلون شد. پلاسمید pET28a به روش شوک حرارتی وارد E.coli BL21DE3 گردید و فرآیند کلونینگ با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرار گرفت. باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب با استفاده ازIPTG القا شده و سپس بیان پروتئین توسط ژل SDS-PAGE بررسی شد.
بخشی از ژنmuc-1 در پلاسمید مذکور کلون گردید و با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید. بیان ژن مورد نظر با استفاده از وسترن بلاتینگ تائید گردید.
بخشی از ژن muc-1 انسانی به صورت نوترکیب در باکتری E.coli تولید و تخلیص گردید که کاندید مناسبی برای تشخیص سرطان می باشد.