کلونیگ ژن کد کننده ی آنزیم هیستامیناز نخود

هیستامینازها (دی آمین اکسیداز) در پستانداران از جمله انسان، پوترسین، کادوارین، آگماتین و هیستامین را اکسید می کنند. هیستامیناز با منشاء گیاهی مخصوصا خانواده ی لگومینوز نسبت به هیستامیناز جانوران عمل کاتالیزوری بهتر و سریعتری دارد. اخیرا هیستامیناز با منشاء گیاهی در ساخت دارو برای درمان بیماری هایی مختلفی نظیر شوک آنافیلاکسی قلبی، افت فشار خون، سردرد های عروقی، نقص در عملکرد روده، سرطان و غیره مورد استفاده قرار می گیرند. هدف از انجام این مطالعه جداسازی و همسانه سازی ژن کد کننده آنزیم هیستامیناز نخود به منظور بیان در گیاه و تولید پروتئین نوترکیب هیستامیناز گیاهی به مقدار فراوان می باشد.
دراین مطالعه تجربی، از تعداد 5 جوانه سفید رنگ هفت روزه نخود توده ی محلی گریت،RNA ی کل استخراج و سپس با استفاده از آنزیم نسخه برداری معکوس، cDNA تک رشته ای سنتز شد. در مرحله ی بعد، ژن هیستامیناز توسط آغازگرهای اختصاصی تکثیر و محصول PCR از ژل خالص سازی شد. در نهایت همسانه سازی در ناقلpTZ57RT با استفاده از روش های مولکولی مرسوم مورد تائید قرار گرفت.
در این تحقیق، cDNAی کد کننده ی آمینواکسیداز حاوی مس از نخود به کمک روش های مولکولی جداسازی و همسانه سازی گردید. نتایج توالی یابی مشخص نمود که این cDNA دارای یک چهارچوب قرائت باز (ORF ) به طول 2013 نوکلئوتیدی بود و پروتئینی با 670 اسیدآمینه با وزن مولکولی7/75 کیلو دالتون را کد می کند . این توالی 99 درصد با نخود زراعی و 85 درصد با نخودفرنگی مشابه بود.
از ژن کد کننده ی آنزیم هیستامیناز با منشاء گیاهی برای تولید داروهای جدید استفاده می شود و با بیان آن در سیستم های گیاهی می توان مواد غذایی حاوی هیستامیناز تولید کرد و آنزیم بیان شده را در گیاه خالص سازی نمود.