کلونینگ و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سیستم یوکاریوتی

هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین باکتری است که جوامع انسانی را در ابعاد جهانی مبتلا به عفونت ساخته است. بیان فلاژل و تحرک باکتری در کلونیزاسیون و ویرولانس آن عامل بسیار مهمی است. ژن flaA یکی از ژن های کد کننده فلاژلین می باشد که نقش کلیدی در حرکت باکتری و کلونیزاسیون آن دارد و از نظر ایمنی بخشی نیز مورد توجه می باشد. هدف از این مطالعه طراحی، ساخت سازواره و بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول های یوکاریوتی است.
در این مطالعه تجربی، ابتدا از هلیکوباکتر پیلوری سویه استاندارد، DNA ژنومی تخلیص و ژن flaA با پرایمرهای اختصاصی به روش PCR تکثیر و جداسازی شد. سپس با بهره گیری از تکنیک همسانه سازی T/A در پلاسمید pTZ کلون گردید. به منظور بیان ژن flaA و ایجاد سازواره نهایی، ژن flaA از پلاسمید pTZ خارج شد و در وکتور بیانی (-)pcDNA3.1 ساب کلون گردید. سازواره -flaA(-)pcDNA3.1 به روش الکتروپوریشن به سلول جانوری CHO منتقل و بیان یوکاریوتی ژن flaA با تکنیک SDS-PAGE بررسی شد.
نتایج نشان می دهد محصول PCR ژن flaA در وکتور pTZ کلون و در باکتری اشریشیا کلای سویه TOP10F تکثیر یافته است. همچنین هضم آنزیمی و تعیین توالی حاکی از تشکیل سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 است. در نهایت بررسی بیان ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول جانوری CHO، نشان داد سازواره ژنی حاصل قادر به بیان موفق محصول ژن flaA در سیستم یوکاریوتی می باشد.
با توجه به اینکه سازواره نهایی -flaA(-)pcDNA3.1 قادر به بیان محصول پروتئینی ژن flaA هلیکوباکتر پیلوری در سلول های جانوری می باشد و پروتئین فلاژلین یکی از آنتی ژن های مهم این باکتری است. بنابراین به درستی می توان گفت که سازواره ژنی
-flaA(-)pcDNA3.1 کاندیدای مناسبی برای استفاده در زمینه واکسن های ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری می باشد و در تحقیقات آینده می توان از آن برای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی بهره گرفت.