تولید پلی هیدروکسی بوتیرات با استفاده از عصاره آنزیمیآزوسپریلوم برازیلنس در محیط عاری از سلول

پلی هیدروکسی آلکانوات ها (PHAS) پلیمرهای باکتریایی هستند که معمولا به عنوان پلی استر ذخیره ای توسط طیف گسترده ای از میکروارگانیسم ها تحت شرایط عدم تعادل مواد غذایی ساخته می شوند و خواص مکانیکی پلی هیدروکسی آلکانوات ها آنها را جهت جایگزینی با پلاستیک های تولیدشده از مواد پتروشیمی مشابه مناسب ساخته است.؛اما برخلاف پلاستیک های رایج در طبیعت به طور کامل به CO2 و H2O تبدیل می شود. PHA می تواند به وسیله روش های بیوتکنولوژی تحت شرایط کنترل شده تولید شود.‏‏
مواد و روش‏‏ها: ابتدا یک سوسپانسیون میکروبی غنی از PHB آماده شد و پس از شکستن سلول ها و اطمینان از نبود سلول زنده، به محیط حداقل یا محیط M9 اضافه شد. سپس کدورت نمونه در طول موج 600 نانومتر اندازه گیری شد و انکوباسیون در 30 درجه سلسیوس و rpm 120 صورت گرفت. بعد از طی مدت زمان تعیین شده کدورت محلول و میزان PHB موجود در محیط اندازه گیری شد و از مقدار شاهد کسر گردید. میزان گلوکز محیط نیز اندازه گیری شد؛ سپس روی نمونه PHB استخراج شده آنالیزهای فیزیکی و شیمیایی جذب UV، FTIR، HPLC و HNMR1 انجام شد و با نمونه استاندارد مقایسه گردید.‏‏
در آزمایش های انجام شده در دوازده روز متوالی از روز سوم میزان پلی هیدروکسی بوتیرات قابل اندازه گیری بود. و در روز دهم بیشترین مقدار پلی هیدروکسی بوتیرات که 3/0 گرم در صد بود حاصل شد و بعد از آن میزان پلی هیدروکسی بوتیرات ثابت ماند. در ضمن میزان قند نمونه هر روز کاهش پیدا می کرد و در روز دهم به مقدار 2/0 گرم برلیتر رسید، آنالیز فیزیکوشیمیایی نیز تولید پلی هیدروکسی بوتیرات را تایید کرد.
بحث و نتیجه گیری: در این پژوهش آزمایش با استفاده از کلیه آنزیم های باکتری در خارج از سلول انجام گرفت با توجه به نتایج به دست آمده در این پژوهش بازده واکنش 5/37درصد است که با خالص سازی آنزیم و استفاده از سوبسترای اختصاصی و بهینه کردن شرایط آنزیم می توان تولید PHB را به طور مستمر در خارج از سلول ادامه داد.