بیان پروکاریوتی پروتئین کایمر سه تایی3M2e-HA2-NP حاصل از نواحی حفاظت شده پروتئینهای ویروس آنفلوانزای A/H1N1 در راستای دست یابی به واکسن زیر واحدی فراگیر

ویروس آنفلوانزا A یک پاتوژن تنفسی مهم است که باعث بیماری و مرگ و میر گسترده در طول اپیدمی های فصلی و پاندمی ها می شود. واکسن های رایج آنفلوانزا توانایی ایجاد ایمنی موثر در برابر سویه های مختلف ویروس آنفلوانزا را ندارند. طراحی واکسن های فراگیر با استفاده از آنتی ژن های حفاظت شده ی ویروس آنفلوانزا در جهت رفع این محدودیت می باشد. ناحیه بیرونی پروتئین M2 آنفلوانزا (M2e)، ساقه هماگلوتینین (HA2) و نوکلئوپروتئین (NP) بخشهای بسیار حفاظت شده در میان زیرگونه های مختلف ویروس آنفلوانزا A هستند. هدف این مطالعه، افزودن بخشی از ژن NP به سازه ی دوتایی 3M2e-HA2 و بیان کایمر سه تایی در سیستم پروکاریوتی بود. این پروتئین نوترکیب کاندید آنتی ژنی نوید بخشی برای تولید واکسن فراگیر محسوب می شود.
ابتدا بخشی از ژن NP ویروس آنفلوانزای انسانی سویه A/H1N1(PR/8/34) با روش PCR و با استفاده از پرایمر های اختصاصی طراحی شده تکثیر شد. ژن تکثیر شده در وکتور کلونینگ pGEM-TEasy کلون شد. سپس ژن NP تایید شده در وکتور بیانی نوترکیب pET28a-3M2e-HA2 در پایین دست قطعه ی HA2 کلون شد. پس از تایید کلونینگ، پروتئین کایمر در باکتری E.coli سویه BL21(DE3) بیان شد.
نتایج Colony PCR، هضم آنزیمی و تعیین ترادف نشان دادند که قطعه انتخابی ژن NP در وکتور نوترکیب pET28a-3M2e-HA2 به درستی جایسازی شده است. بیان پروتئین کایمرتوسط SDS-PAGE بررسی و با آزمایش وسترن بلات تایید شد.
استنتاج: طراحی و تولید پروتئین نوترکیب 3M2e-HA2-NP می تواند گام مهمی درجهت تولید واکسن فراگیر به منظور مقابله با زیرگونه های مختلف ویروس آنفلوانزا باشد.