ردیابی و شناسایی Phytophthora drechsleri از خاک، آب و بافت آلوده درختان پسته با استفاده از روش PCR

بیماری پوسیدگی طوقه و ریشه یکی از مهم ترین بیماری های خاک زاد پسته به شمار می رود. از این رو تشخیص به موقع بیمارگر نقش مهمی در مدیریت موثر این بیماری دارد. به همین منظور شناسایی و ردیابی مولکولی Phytophthora drechsleri از آب، خاک و بافت آلوده بر اساس تکثیر قطعه ی اختصاصی از ناحیه rDNA-ITS با استفاده از آغازگر اختصاصی DF2/DR2 انجام گرفت. طی سال های 1389-1390، تعداد 46 جدایه P. drechsleriو 17 جدایه Phytophthora citrophthora جداسازی و شناسایی گردید. حساسیت و اختصاصیت جفت آغازگر به ترتیب با استفاده از 15 جدایهP. drechsleri و 25 جدایه از سایر گونه های Phytophthora و همچنین قارچ های خاک زاد پسته بررسی شد. نتایج نشان داد که این جفت آغازگر قادر به تکثیر اختصاصی قطعه 567 جفت بازی از ژنوم دی.ان.ای بیمارگر می باشد درحالی که هیچ باندی همراه با دی.ان.ای سایر گونه های قارچی خاک زاد تکثیر نشد. حساسیت جفت آغازگر، در ردیابی بیمارگر با استفاده از PCR معمولی، 100پیکوگرم از دی.ان.ای خالص بیمارگر بود. جفت آغازگر قادر به ردیابی مستقیم 103×17 زئوسپور در هر میلی لیتر ( تعداد 85 زئوسپور) و تکثیر باند 567 جفت بازی با دی.ان.ای استخراج شده از نمونه خاک آلوده بود. ردیابی مستقیم بیمارگر از بافت آلوده پسته به علت حضور مواد بازدارنده امکان پذیر نشد بدین منظور ردیابی بیمارگر به روش تله با استفاده از میوه سیب سه روز پس از مایه زنی مصنوعی با بافت و خاک آلوده پسته انجام گرفت. بر اساس نتایج به دست آمده، این روش ردیابی بیمارگر، به دلیل حساسیت، اختصاصی بودن و سرعت بالا به عنوان مناسب ترین روش جهت ردیابی P. drechsleriاز نمونه های خاک و آب تشخیص داده شد که می تواند کمکی برای تشخیص بیماری به عنوان بخشی از راهکار کنترل این بیماری مورد استفاده قرار گیرد.