بهینه سازی باززایی و عوامل موثر بر انتقال ژن با واسطه اگروباکتریوم در ارقام تجاری پنبه ایرانی (Gossypium hirsutum L.)

مهندسی ژنتیک نقش مهمی در اصلاح مدرن پنبه دارد. با وجودی که موفقیت های بسیاری در مطالعات انتقال ژن به پنبه حاصل شده است، اما هنوز محدودیت های زیادی در ایجاد پنبه تراریخت وجود دارد. باززایی وابسته به ژنوتیپ و ریزنمونه کاربرد ارقام مختلف را در مطالعات انتقال ژن این گیاه محدود می کند. در این مطالعه یک پروتکل بهبود یافته برای باززایی و مهندسی ژنتیک پنج رقم تجاری با استفاده از حامل حاوی ژن nptII توصیف شده است. چندین پارامتر برای بهینه سازی انتقال ژن به این ارقام مورد بررسی قرار گرفت. مشخص شد که محیط (MS+ B5، 0.1 mg/L NAA، 0.1 mg/L 6-BA، + 2.5 g/l phytage) بیش ترین درصد باززایی (98 درصد) را ایجاد می کند، هم چنین پیش کشت کوتاه مدت ریزنمونه ها به مدت 5-4 ساعت در محیط حاوی سیتوکنین، تلقیح به مدت 20 دقیقه در محیط MS مایع حاوی 100 میکرومولار استوسیرینگون و استفاده 3/0: OD، همکشتی به مدت دو روز و همچنین افزودن 200 میکرومولار استوسیرینگون به محیط هم کشتی برای تلقیح بیشترین کارایی ترانسفورماسیون را دارد. نتایج PCR وKan-painting در گیاهان T1 نشان داد که ژن nptII در ژنوم پنبه درج و به خوبی بیان می شود.