ساخت همسانه عفونت زای ویروئید های مرکبات و اثبات بیماری زایی آنها

ویروئیدها آر ان ا های بیماری زا در گیاهان هستند که توانایی رمز کردن پروتئین را ندارند. تاکنون هفت ویروئید از چهار جنس خانواده Pospiviroidaeاز مرکبات گزارش شده اند.با ساخت همسانه عفونت زای ویروئید های مرکبات امکان سنجش بیماری زایی آنها فراهم شد. از آر ان ا کل استخراج شده از نهال پرتقال خونی مورو ژنوم کامل ویروئیدهای CEVd، HSVd، CBCVd، CDVd، CVdV و CBLVd در واکنش RT-PCR تکثیر و توالی یابی شد. سپس ژنوم کامل هر ویروئید بطور جداگانه در ناقل دوتایی pBin62SK تحت کنترل پیشبر s35 ویروس موزائیک گل کلم (Cauliflower mosaic virus، CaMV) قرار گرفت. بیماری زایی ویروئیدها در گیاهان خیار(Cucumis sativus)، گوجه فرنگی (Solanum lycopersicum) و نارنج سه برگ (Poncirus trifoliata) از طریق مایه زنی اگروباکتریوم حاوی سازه های عفونت زای آنها انجام شد. سه هفته پس از مایه زنی حضور ویروئیدها در برگ های جدید گیاهان مایه زنی شده با آزمون RT-PCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و هیبریداسیون نقطه ای با کاوشگر اختصاصی هر ویروئید تائید شد. پنج هفته پس از مایه زنی، علائم ریزبرگی، پیسک و روخمشی توسط CVdV و CBCVd، پیسک توسط CDVd و علایم روخمشی و بدشکلی برگ بوسیله CEVd، HSVd و CBLVd در برگ های گوجه فرنگی ظاهر شدند. مایه زنی مکانیکی عصاره آلوده به گیاهان سالم نیز علائم مشابهی را تولید کرد. ردیابی ویروئید در برگ های جدید گیاهان مایه زنی شده بیانگر عفونت زایی سازه ساخته شده است. همسانه های عفونت زای CEVd، HSVd و CBCVd پیش تر ساخته شده است ولی این اولین گزارش از ساخت همسانه عفونت زای ویروئیدهای CDVd، CBLVd وCVdV است.