همسانه سازی، بیان و خالص سازی اورات اکسیداز نوترکیب با استفاده از توالی اینتئین و پروتئین شبه الاستین

بیان و خالص سازی اورات اکسیداز نوترکیب همانند سایر پروتئین های دارویی مستلزم صرف هزینه های زیادی است. استفاده از روش های غیرکروماتوگرافی در فرآیند خالص سازی می تواند سبب کاهش هزینه های تولید شود. بنابراین، هدف پژوهش حاضر، همسانه سازی، بیان و خالص سازی اورات اکسیداز نوترکیب با استفاده از توالی اینتئین و پروتئین شبه الاستین بود.
در پژوهش تجربی حاضر، ژن صناعی اورات اکسیداز در پایین دست توالی اینتئین و پروتئین شبه الاستین در پلاسمید بیانی قرار داده شد. بعد از کشت باکتری حاوی پلاسمید بیان کننده اورات اکسیداز، سلول ها لیز و محتوی پروتئین محلول از غیرمحلول به وسیله سانتریفوژ جدا شد. با افزودن نمک به بخش محلول حاوی اورات اکسیداز و در دمای Co37، آنزیم مورد نظر رسوب داده شد. با انحلال رسوب در بافر خاص برش و به واسطه حضور توالی اینتئین، اورات اکسیداز تولیدشده از پروتئین شبه الاستین جدا شد. با افزودن مجدد نمک در دمای Co37 پروتئین شبه الاستین رسوب و اورات اکسیداز در محلول باقی ماند. پس از بیان و خالص سازی اورات اکسیداز، میزان خلوص و فعالیت زیستی آن مورد ارزیابی قرار گرفت و با داروی استاندارد مقایسه شد.
آنزیم اورات اکسیداز نوترکیب به صورت فیوژن با توالی کدکننده اینتئین و پروتئین شبه الاستین بیان و خالص شد. میزان خلوص 90% در این روش حاصل شد که معادل 89/1میلی گرم در میلی لیتر پروتئین بود. میزان مذکور معادل 64/1میلی گرم براساس فعالیت آنزیمی بود.
استفاده از توالی اینتئین و پروتئین شبه الاستین به صورت همراه با آنزیم اورات اکسیداز به بیان و خالص سازی این آنزیم بدون نیاز به روش کرماتوگرافی کمک می کند.