همسانه سازی و بیان ژن مولد پپتید AcAMP از قارچ Aspergillus clavatus در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری

پپتیدهای ضد میکروبی به عنوان منادی تغییر آنتی بیوتیک های امروزی مورد توجه قرار گرفته اند. پپتید ضد میکروبی AcAMP یکی از این موارد بوده که از قارچ رشته ای ES1 Aspergillus clavatus تخلیص و خواص بیوشیمیایی آن بررسی گردیده و مشخص شد که این پپتید دارای خواص منحصر بفردی می باشد. هدف این مطالعه، بیان ژن مولد پپتید AcAMP در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش می باشد.
در این مطالعه تجربی ژن مولد پپتید AcAMP با جایگاه های آنزیمی BamHI و SalI از پلاسمید pUC57 با استفاده از PCR، تکثیر و در وکتور بیانی pET28a(+) همسانه سازی و به باکتری اشریشیا کولی سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان پروتئین نوترکیب AcAMP با IPTG القاء و به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص گردید. به منظور تایید پروتئین نوترکیب western blotting انجام گرفت. موش ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده ایمن شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت.
عمل همسانه سازی در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله واکنش PCR و توالی یابی تائید گردید. پروتئین نوترکیب 9 کیلودالتونی تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن مورد تایید قرار گرفت. روند تولید آنتی بادی با استفاره از الایزا غیر مستقیم نشان دهنده ی روند افزایشی آنتی بادی مخصوصا پس از تزریق چهارم می باشد.
از پپتید AcAMP نوترکیب تخلیص شده و آنتی بادی تولید شده می توان در تحقیقات ضد میکروبی اعم از بررسی عملکرد ضد میکروبی پپتید نوترکیب و شناسایی پپتید در کاربرد های مختلف استفاده نمود