مقایسه روش های مختلف شوک اسمزی در استحصال فاکتور محرک رشد کلونی گرانولوسیت انسانی تولیدشده در پری پلاسم

نوع مقاله:
مقاله پژوهشی/اصیل (بدون رتبه معتبر)
چکیده:
مقدمه
در سال های اخیر، علاقه به تولید پروتئین های ترشحی به علت فواید گوناگون تولید پروتئین نوترکیب در فضای پری پلاسمی نسبت به سیتوپلاسم افزایش یافته است. در این میان، پپتیدهای نشانه نقش حیاتی در ترشح پروتئین دارند و نوع روش استفاده شده در میزان پروتئین ترشحی استخراج شده مهم است. فاکتور محرک رشد کلونی گرانولوسیتی (GCSF) نوعی سیتوکین، هورمون و فاکتور محرک کلونی است که باعث تحریک تکثیر، تمایز و تداوم بقای نوتروفیل ها و پیش سازهای این سلول ها می شود و در برخی سرطان ها، برای بهبود تعداد نوتروفیل های کاهش یافته پس از شیمی درمانی استفاده می شود. هدف مطالعه حاضر، ارزیابی روش های مختلف شوک اسمزی برای دستیابی به بیشترین میزان پروتئین GCSF تولیدی در باکتری E.coli سویه BL21 است.
مواد و روش‏‏ها: باکتری E.coli دارای وکتور بیانی pET22b–GCSF2–Intein2 در محیط کشت 4YT کشت و سپس، بیان پروتئین با کمک IPTG 1 میلی مولار القا شد. وکتور pET22b دارای توالی پپتید نشانه pelB برای جهت دهی پروتئین ها به فضای پری پلاسمی است. در مرحله بعد، از سه روش متفاوت شوک اسمزی برای جداسازی پروتئین نوترکیب انسانی تولید شده استفاده شد. سپس پروتئین های جداسازی شده با روش های SDS Page و وسترن بلات تحلیل شد.
نتایج
نتایج بررسی حاضر نشان دادند که پروتئین GCSF در هر دو فضای سیتوپلاسمی و پری پلاسمی تولید می شود و استفاده از بافر تریس و سولفات منیزیم، بهترین روش شوک اسمزی برای استخراج پروتئین است.
بحث و نتیجه گیری: با توجه به یافته های پژوهش حاضر، استفاده از سولفات منیزیم در کنار بافر تریس فشار اسمزی بیشتری ایجاد می کند و روش موثرتری برای استحصال پروتئین GCSF است. در نتیجه، این روش برای تولید و جداسازی آسان محصولات دارویی نوترکیب استفاده می شود.
زبان:
فارسی
صفحات:
43 تا 50
لینک کوتاه:
magiran.com/p1868404 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!