طراحی و بیان پروتئین نوترکیب از ژن tcpA ویبریوکلرا در وکتور (+)pET32a
ویبریوکلرا یک باکتری پاتوژن گرم منفی است که عامل بیماری اسهال است. یکی از مهمترین عوامل بیماریزایی باکتری ویبریوکلرا است؛ پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است که برای کلونیزاسیون باکتری در روده الزم است. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی و بیان پروتئین نوترکیب TcpA بود.
ژن tcpA به لحاظ وجود کدون های نادر بررسی و بهینه سازی ژن با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. طراحی پرایمر جهت تکثیر ژن سنتزی tcpA انجام گرفت. ژن سنتزی در وکتور (+)pET32a همسانه سازی شد. پالسمید نوترکیب tcpA(+)-pET32a در باکتری coli.E سویه (DE3(BL21 تراریخت شد. بیان ژن tcpA تحت القای IPTG 1 میلی موالر انجام گردید. بیان پروتئین نوترکیب با روش PAGE-SDS و وسترن بالتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی NTA-Ni استفاده شد.
ژن طبیعی tcpA دارای شاخص انطباق پذیری 6/0 بود، در حالی که ژن بهینه سازی شده دارای شاخص انطباقپذیری 9/0 بود. با بهینه سازی ژنی درصد کدون های با ترجیح باال به 75 %افزایش یافت. آنالیز آنزیمی همسانه سازی ژن tcpA کلون شده در وکتور (+)pET32a را تایید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 6/38 کیلو دالتون در PAGE-SDS دیده شده و واکنش آن با آنتی بادی ضد هیستیدین در وسترن بالت تایید گردید. میزان پروتئین خالص شده 533/11 میلیگرم در لیتر بود.
بهینهسازی ژنی منجر به بیان باالی پروتئین نوترکیب TcpA شد. با توجه به خاصیت آنتی ژنیسیته tcpA ،این پروتئین میتواند کاندیدای مناسبی به منظور توسعه ایمنی علیه وبا باشد.
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.