طراحی و بیان پروتئین نوترکیب از ژن tcpA ویبریوکلرا در وکتور (+)pET32a

پیام:
نوع مقاله:
مقاله پژوهشی/اصیل (دارای رتبه معتبر)
چکیده:
زمینه و هدف

ویبریوکلرا یک باکتری پاتوژن گرم منفی است که عامل بیماری اسهال است. یکی از مهمترین عوامل بیماریزایی باکتری ویبریوکلرا است؛ پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است که برای کلونیزاسیون باکتری در روده الزم است. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی و بیان پروتئین نوترکیب TcpA بود.

روش بررسی

ژن tcpA به لحاظ وجود کدون های نادر بررسی و بهینه سازی ژن با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. طراحی پرایمر جهت تکثیر ژن سنتزی tcpA انجام گرفت. ژن سنتزی در وکتور (+)pET32a همسانه سازی شد. پالسمید نوترکیب tcpA(+)-pET32a در باکتری coli.E سویه (DE3(BL21 تراریخت شد. بیان ژن tcpA تحت القای IPTG 1 میلی موالر انجام گردید. بیان پروتئین نوترکیب با روش PAGE-SDS و وسترن بالتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی NTA-Ni استفاده شد.

یافته ها

ژن طبیعی tcpA دارای شاخص انطباق پذیری 6/0 بود، در حالی که ژن بهینه سازی شده دارای شاخص انطباقپذیری 9/0 بود. با بهینه سازی ژنی درصد کدون های با ترجیح باال به 75 %افزایش یافت. آنالیز آنزیمی همسانه سازی ژن tcpA کلون شده در وکتور (+)pET32a را تایید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 6/38 کیلو دالتون در PAGE-SDS دیده شده و واکنش آن با آنتی بادی ضد هیستیدین در وسترن بالت تایید گردید. میزان پروتئین خالص شده 533/11 میلیگرم در لیتر بود.

نتیجه گیری

بهینهسازی ژنی منجر به بیان باالی پروتئین نوترکیب TcpA شد. با توجه به خاصیت آنتی ژنیسیته tcpA ،این پروتئین میتواند کاندیدای مناسبی به منظور توسعه ایمنی علیه وبا باشد.

زبان:
فارسی
صفحات:
12 تا 24
لینک کوتاه:
magiran.com/p1879689 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!