بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات دومین متصل شونده به IP3 نوع 2 انسانی

پیام:
نوع مقاله:
مقاله پژوهشی/اصیل (دارای رتبه معتبر)
چکیده:
اهداف: IP3 یک مولکول کلیدی تنظیم کننده در مسیر انتقال پیام است و با اتصال به گیرنده های درون سلولی IP3R روی سطح ذخایر کلسیم داخل سلولی باعث آزادسازی کلسیم به درون سیتوپلاسم می شود. هدف این پژوهش، بیان، تخلیص و تعیین خصوصیات دومین متصل شونده به IP3 )IP3BD: 1-604 aa (نوع 2 انسانی بود.
مواد و روش ها
در پژوهش تجربی حاضر، پلاسمید pET-28a حامل ژن IP3BD با روش شیمیایی به داخل باکتری های بیانی E. coli سویه BL21) DE3( منتقل شد. برای بهینه سازی بیان در سیستم باکتریایی، بیان در شرایط مختلف مورد بررسی قرار گرفت و دماهای بیان مختلف از جمله 16، 18، 20 و C24o، زمان های مختلف بعد از القا، نوع القاکننده و غلظت های مختلف آن بررسی شد. باکتری های القاشده براساس شوک حرارتی از طریق کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل- سفارز تخلیص و میزان خلوص پروتئین از طریق SDS-PAGE بررسی شد. نشر فلورسانس دومین متصل شونده به IP3 در حضور و عدم حضور لیگاند IP3 در طول موج 295نانومتر اندازه گیری شد.
یافته ها
پروتئین در محیط های LB و TB و 2xYT بیان قابل توجهی نداشت و در زمان های مختلف تغییری در آن مشاهده نشد. بیان پروتئین باکتری در دمای C20o براساس شوک حرارتی C42o نسبت به تمام حالات بیشتر بود. تخلیص باکتری های القاشده براساس شوک حرارتی به سختی تکرار می شد و نمونه های خالص شده نیز غلظت بالایی نداشتند. نشر فلورسانس پروتئین در حضور لیگاند IP3 کاهش یافت.
نتیجه گیری
بیان باکتریایی دومین متصل شونده به IP3 از گیرنده نوع 2 گونه انسانی ضعیف است، ولی با القای شوک C42o بیان پروتئین تا حدود نسبتا زیادی افزایش می یابد.
زبان:
فارسی
صفحات:
165 تا 169
لینک کوتاه:
magiran.com/p1883951 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!